阿拉丁生产的 FnCas12a (Cpf1)，也称为 Cpf1，是本公司自主研发的技术平台表达、纯化获得的一种由 RNA 引导的可编辑 DNA 的重组核酸内切 酶，具有基因编辑效率高，脱靶效率低的优点。FnCas12a 来源于 Francisella novicida U112， 分子量大约为 154kDa。FnCas12a 识别含有 TTN 的 PAM 序列，并且 FnCas12a 的切割位点相对远离其识别位点为多次编辑提供了可能性，这些特点使 Cas12a 与 Cas9 可以互为补充。只需简单将 guide RNA (gRNA)与 Cas12a 蛋白相结合，由于该 gRNA 仅含有 crRNA，无需 trans-activating crRNA (tracrRNA)即可实现基因编辑的目的。 FnCas12a 包含约 1300 个氨基酸，含有 RuvC-like 结构域，同时具有 DNA 和 RNA 内切酶的活性。研究表明，FnCas12a 与 Cas9 由于两者结构的 不同导致了其分子机制有所差异。CRISPR-Cas12a 系统是由 Cas12a 和 gRNA (crRNA，仅需约 40-44 个碱基)组成。FnCas12a 由 gRNA 引导 至互补链，识别互补链上 5'端短的富含 T 碱基(5'-TTN-3')的 PAM (Protospacer adjacent motif)序列，然后 FnCas12a 中的 RuvC 核酸内切酶结构 域逐个切割互补链和靶链，以产生交错的 DNA 双链断裂，断裂发生在 PAM 序列 3'端的约第 18 个碱基处，切割产物为 5'端突出 4 或 5 个碱基的粘 性末端。而 CRISPR-Cas9 系统是由 Cas9 和 gRNA (crRNA 和 tracrRNA 两个 RNA 分子融合而成)组成，Cas9 在 gRNA 的引导下，识别 3'端富含 G 碱基(5'-NGG-3')的 PAM 序列，并且 Cas9 需要使用 HNH 和 RuvC 两个核酸酶结构域协同切割 DNA，断裂通常发生在 PAM 序列 5'端的第 3 个碱基 处，最终产生平末端。

纯度（Purity）：不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶。  

失活或抑制（Inactivation or inhibition）：65℃加热 10 分钟失活。

组分和说明

产品应用 

可用于基因编辑和基因检测等。线粒体或质粒 DNA 等双链环形 DNA 的线性化。 

产品优势 

FnCas12a (Cpf1)酶的 C 端融合了核定位信号(Nuclear localization signal, NLS)，NLS 有助于 FnCas12a 进入细胞后定位至细胞核，从而提高基 因编辑的效率。

使用说明 

FnCas12a (Cpf1)体外消化靶 DNA 

1.溶解并混匀体外消化反应所需的各种溶液。将 F Cas12a、gRNA、底物 DNA 置于冰浴上，使用无核酸酶水稀释 gRNA 至 300nM，底物 DNA 至 30nM。 

2.按照下表配制反应体系(以 30μl 体系为例)：

3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。25℃预孵育 10min。 

4.加入 3μl 30nM 底物靶 DNA (30μl 最终体积)，轻轻混匀(用移液器轻轻吹打混匀或用涡旋混合器在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀 液体，37℃孵育 10min。 

5.向每个样品中加入 1μl 蛋白酶 K ，轻轻混匀， 室温孵育 10min。 

6.向反应体系中加入 6μl DNA 上样缓冲液(6X) ，然后使用 1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）本产品使用过程中需要确保 Nuclease-free，操作时应特别小心，避免被污染。所有操作都需要按照 RNase-free 的要求进行。 

（2）对于操作环境中核酸酶的去除，推荐使用阿拉丁生产的 RNase and DNase Away (R749971) 以去除实验桌面上或其它接触面上的核酸酶。反应体系中 推荐加入 RNase Inhibitor 以保护 RNA 不被降解。 

（3）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。