本公司生产的T4RNA连接酶2截短型(T4Rnl2,truncated或Rnl2(1-249))，该酶仅包含T4RNA连接酶2N端249个氨基酸，可特异性地将5'端预腺苷酰化的DNA或RNA(App-DNA或App-RNA)连接到RNA的3'羟基。T4RNALigase2,truncated与T4RNALigase2的酶活性完全不同，后者是一种ATP依赖的dsRNAligase，而前者是一种不依赖于ATP的，依赖于5'端预腺苷酰化的单链核酸连接酶。T4RNALigase2,truncated常用于microRNA(miRNA)等3'端为羟基的单链RNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时，在3'羟基端添加5'端预腺苷酰化的DNA或RNA接头。T4RNALigase2,truncated只能利用5'端预腺苷酰化的单链DNA或RNA作为3'端接头，因此可以大大降低连接反应的背景，通常是小RNA等建库时的优先选择。T4RNALigase2,truncated连接时不需要ATP，但需要5'端预腺苷酰化(也称预腺苷化、腺苷酰化或腺苷化)底物。即使在有ATP存在的情况下，T4RNALigase2,truncated也不能催化连接单链DNA或RNA5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键。而T4RNALigase1可以在ATP存在的情况下，催化连接单链DNA或RNA5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键。因此T4RNALigase2,truncated特别适用于smallRNAlibrary的制备，不管是进行miRNA的测序还是进行directionalmRNA-Seq，该酶都可以提高建库的质量，并有效降低连接反应的背景。

纯度（Purity）：无 DNA 内切酶和外切酶活性，无 RNA 酶活性，无蛋白酶活性。
组分和说明

产品应用 

5'末端预腺苷酰化的单链 DNA 或者 RNA 与单链 RNA 的 3'羟基末端连接；cDNA 文库构建中连接 5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和小 RNA；链特 异性的 cDNA 文库(strand-specific cDNA library)构建中连接 5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和 RNA；二代测序中，miRNA 文库构建中 RNA 的 3'末端与接头之间的连接；cDNA 文库的构建以进行小 RNA 转录组分析(small-RNA transcriptome analysis)。

产品优势 

T4 RNA Ligase 2, truncated 常用于 microRNA (miRNA)等 3'端为羟基的单链 RNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时，在 3'羟基端添加 5' 端预腺苷酰化的 DNA 或 RNA 接头。  

使用说明 

1.用于连接 5'端腺苷酰化并且 3'端不是羟基的(例如为氨基)单链 DNA (AppDNA-NH2)和 3'端为羟基的单链 RNA (ssRNA)的使用说明具 体如下。需要提前准备好待连接的样品，以及 Universal miRNA Cloning Linker 或自备的适当接头。 

2.参考下表在冰浴中配制如下反应体系：

注意： 

a.由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者 确保是 RNase free 的。推荐在连接体系中添加 RNase Inhibitor，以避免 ssRNA 或其连接产物的降解，尽管经测试我们发现在严格操作 的情况下，不加 RNase Inhibitor 也不会导致 ssRNA 或其连接产物发生明显降解。 

b.进行连接反应时，如果样品 RNA 比较珍贵，希望充分被连接，可以按照接头和样品 RNA 的摩尔比为 2:1 的比例进行连接；如果样品 RNA 比较充裕，同时感觉接头的成本偏高时，可以按照接头和样品 RNA 的摩尔比摩尔比 1:1 甚至 1:2 的比例进行连接反应，这样可以很 好地节省接头。ssRNA 的用量可以根据实际的样品量进行适当调节，相应的接头的用量也按照比例进行适当调整即可。

 c.如果同时进行多个连接反应，可以把上表中除 ssRNA 之外的所有溶液和酶提前预混合，然后再分装到各反应管内。 

3.连接反应：25℃, 孵育 60min。为了使连接反应更加充分，可以适当延长连接反应时间。 

4. 终止反应：65℃，孵育 20min。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）本产品提供的试剂均用不含 DNA 酶和 RNA 酶的水配制，可直接用于 3'端为羟基的单链 RNA 和 5'端腺苷酰化的 DNA 或 RNA 之间的连接反 应。 

（2）可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如 RNase inhibitor、DEPC 水等。 

（3）使用本产品连接 ssRNA 和 AppDNA 时，建议使用的 PEG8000 的浓度为 10%-30%，适当提高 PEG8000 的浓度，会显著提高 T4 Rnl2, truncated 的催化的连接效率，而不改变其反应特性。 

（4）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。