本公司生产的 T4 RNA 连接酶，即 T4 RNA Ligase，是一种 ATP-依赖的可以催化单链 RNA、单链 DNA 或单核苷酸分子间或分子内 5'-P 末端与 3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 主要用于 RNA 和 RNA 之间的连接，连接时需要 5'磷酸基团和 3'羟基的存在。不仅可以进行 RNA分子间的连接，也可以进行 RNA 分子(最短 8 个碱基)的环化连接。T4 RNA Ligase 可以用于 RNA 和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为 5'和 3' 均磷酸化的形式，此时常用于 RNA 的 3'末端标记。T4 RNA Ligase 也可以用于 DNA 和 RNA 之间的连接。当 DNA 提供 5'磷酸基团，RNA 提供 3' 羟基时，连接效率较高；当 DNA 提供 3'羟基，RNA 提供 5'磷酸基团时，连接效率非常低。T4 RNA Ligase 也可以用于 DNA 和 DNA 之间的连接，但连接效率非常低。主要用于 DNA 的环化连接，例如 5' RACE 中的 cDNA 环化。DNA 和 DNA 之间的连接尽管可以进行，但比较困难。
纯度（Purity）: 不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶，不含磷酸酯酶。
组分和说明
| T750871 | Component | 200U | 5*200U | Storage | | T750871A | T4 RNA Ligase(10U/μl) | 200U | 5*200U | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | T750871B | Reaction Buffer(10X) | 40µl | 5*40µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | T750871C | ATP(10mM) | 40µl | 5*40µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | T750871D | BSA(1mg/ml) | 40µl | 5*40µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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产品应用 用 RNA 3'末端标记；RNA 和 RNA 分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA 修饰；5' RACE 中寡核苷酸连接到 cDNA 单链；在蛋白质特定位点引入非 天然氨基酸。
产品优势 T4 RNA Ligase 可以用于 RNA 和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为 5'和 3'均磷酸化的形式，此时常用于 RNA 的 3'末端标记。
使用说明 1. DNA 片段和载体 DNA 的连接 参考下表在冰浴中配制如下反应体系： | Reagent | Volume | Final Concentration | | Water (DNase/RNase free) | To 10µl | - | | Reaction Buffer(10X) | 1µl | 1X | | 插入片段^a | 0.3poml | | | 载体 DNA^b | 0.03poml | | | T4 RNA Ligase(10U/μl) | 40µl | - |
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a.插入片段与载体的摩尔比应在 3:1-10:1 之间。 b.平末端载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。 2.16℃过夜反应 3.连接产物转化 ① 在冰上解冻克隆用的化学感受态细胞(如:DH5a Competent cell)。 ② 取 10µl 连接产物加入到 100µl 感受态细胞中，轻弹管壁混匀(请勿振荡混匀)，冰上静置 30 min。 注：连接产物转化体积最多不应超过所用感受态细胞体积的 1/10。 ③42℃水浴热激 45 sec 后，立即置于冰上冷却 2-3 min。 ④ 加入 900 u SOC 或 LB 培养基(不添加抗生素)，37℃摇菌 1h(200-250 rpm)。 ⑤将相应抗性的 LB 平板固体培养基在 37℃培养箱中预热。 ⑥ 5000 rpm(2,400x g)离心 5 min，弃掉 900 μl 上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。 ⑦37℃培养箱中倒置培养 12-16 h.
保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 注意事项： （1）反应体系中需加入的 ATP 量取决于连接反应的类型；在最终反应体系中 BSA 推荐浓度为 0.1mg/ml。 （2）使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 （3）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 （4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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