本公司生产的 T3 RNA 聚合酶，即 T3 RNA Polymerase，是一种高度特异识别 T3启动子序列的 DNA 依赖的 5'→3' RNA聚合酶。T3 RNA Polymerase 可以催化单链或双链 DNA T3 启动子下游 NTP 的掺入，合成与 T3 启动子下游的模板 DNA 互补的 RNA。

纯度（Purity）: 不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶。

活性检测条件 （ Activity assay conditions） 40mM Tris-HCl, 6mM MgCl² , 10mM DTT, 2mM spermidine, 0.5mM NTP, 0.6MBq/ml [3H]-ATP, pH8.0, 20µg/ml plasmid DNA containing the specific T3 RNA Polymerase promoter sequence。  

组分和说明 

产品应用 

用于 RNA 合成，合成的 RNA 可以用于或用作：杂交探针，基因组 DNA 序列分析，核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay)，反义 RNA 合 成，作为体外翻译的 RNA 模板，RNA 剪接研究的底物，RNA 二级结构和 RNA-蛋白质相互作用，核酸扩增分析，siRNA、miRNA 等小 RNA。 

产品优势 

T3 RNA Polymerase 不仅可以进行常规的 RNA 合成，还可以识别修饰的 NTP，例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的 NTP，可以用于各种标记 RNA 的合成。同时对于 T3 启动子有高度的特异性。

使用说明 

1.RNA 合成： 

a.DNA 模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。 

b.酚/氯仿抽提 DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的 DNA 纯化试剂盒，例如用 DNA 纯化试剂 盒，直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。 

c.参考如下表格设置反应体系：

d.按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。 

e.37℃孵育 1~2 个小时。 

f.加入 2µl 0.5M EDTA (pH 8.0)到反应体系中混匀或-20℃冷却终止反应。 

g.电泳分析转录产物，或通过其他适当方法鉴定转录的效率。 

注意： 

a)转录需在无 RNA 酶条件下进行。 

b)反应体系需在室温条件下配置，4℃有亚精胺(spermidine)存在时 DNA 可发生沉淀。 

c)按以上反应条件，每 1µg 模板 DNA 可合成超过 10µg 的 RNA。 

d)如果模板 DNA 的线形化不太完全，会导致转录出比预期长度更长的 RNA，同时使预期长度的转录本比例下降。 

e)可根据实际情况按照比例放大或缩小上述反应体系。 

2.放射标记 RNA 的合成：

 a.DNA 模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。 

b.酚/氯仿抽提 DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的 DNA 纯化试剂盒，例如 DNA 纯化试剂盒， 直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。 

c.参考如下表格设置反应体系：

d.37℃孵育 1~2 个小时。 

e.-20℃冷却终止反应。 f.分析和检测 RNA 的标记效率。 

注意： 

a)按以上方法合成的 RNA 活性一般为 3-5 x10 8 dpm/µg。 

b)上述标记反应中也可以使用[32 P]、[35 S]或[3H]标记的其他 NTP。使用其他放射性标记的 NTP 时，其他的 NTP 需作相应调整。20µl 反应体系各成分推荐使用剂量分别为：1.85MBq (50µCi) 5'-[α-32P]-CTP, ~30TBq/mmol(800Ci/mmol)；11.1MBq (300µCi) 5'-[α -35S]-UTP, >37TBq/mmol (>1000Ci/mmol)；0.925MBq (25µCi) 5,6-[3H]-UTP, 1.1-2.2TBq/mmol (30-60Ci/mmol)。 c)放射性标记 NTP 浓度低于 12µM 时，全长转录本合成效率也会下降。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 

（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。