本公司生产的牛痘 DNA 拓扑异构酶 I，英文名为 Vaccinia DNA Topoisomerase I，也称牛痘病毒 DNA 拓扑异构酶 I (Vaccinia Virus DNA Topoisomerase I)，是一种来源于牛痘病毒(vaccinia virus)的 I 型真核拓扑异构酶，可以催化双链 DNA 分子中单链 DNA 特定序列位置的磷酸二酯 键的断开和连接。Vaccinia DNA Topoisomerase I 具有解超螺旋的酶(DNA Relaxing Enzyme)活性，可以通过快速的酶切和连接从而使双链共价 闭合环状的正或负超螺旋 DNA 发生解超螺旋，从而可以形成含有较少的正或负超螺旋的双链环状的 DNA 分子。Vaccinia DNA Topoisomerase I 也能使双链 DNA 形成绳结(knotting)或解开绳结(unknotting)，联结互补的单链环状 DNA 成为双链环状 DNA。Vaccinia DNA Topoisomerase I 目前常被作为一种 DNA 重组连接的新型工具酶，用于 DNA 载体和重组片段的连接、缺刻修复、接头连接等。Vaccinia DNA Topoisomerase I 特 异性识别的双链 DNA 中的 5'-… (C/T)CCTT…-3'序列如果位于距离 3'端几个碱基处，当 Vaccinia DNA Topoisomerase I 酶切 DNA 单链后，余下 的带有 5'羟基的单链 DNA 由于非常短而容易解离，此时 Vaccinia DNA Topoisomerase I 与 5'-… (C/T)CCTT…-3'序列中最后一个 T 的 3'磷酸基 团之间形成的共价复合物，也可以被其它的 5'端为羟基的 DNA 或 RNA 所攻击，从而形成重组的 DNA 分子或 DNA 与 RNA 的杂合分子。 纯度（Purity）：未检测到 Vaccinia DNA Topoisomerase I 活力之外的 DNA 外切酶、DNA 内切酶 和 RNase 活性。 组分和说明 | V752120 | Component | 200U | 5*200U | 25*200U | Storage | | V752120A | Vaccinia DNA Topoisomerase I (10U/µl) | 20µl | 5*20µl | 25*20µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | V752120B | 10X Reaction Buffer | 400μl | 5*400μl | 25*400μl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | V752120C | Storage Buffer | 200µl | 5*200µl | 25*200µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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产品应用 Vaccinia DNA Topoisomerase I 可用于解开双链闭合环状 DNA 的超螺旋结构便于后续的酶切等分子生物学反应、DNA 载体和 PCR 扩增片段之间 的连接、缺刻修复和接头连接等。 产品优势 Vaccinia DNA Topoisomerase I 能够特异性识别双链 DNA 中 5'-… (C/T)CCTT…-3'序列，广泛的应用领域，可作为一种体外 DNA 连接的新型工 具，用于 DNA 载体和重组片段的连接、缺刻修复、接头连接等。 使用说明 1.溶解并混匀反应所需的各种溶液。将 Vaccinia DNA Topoisomerase I 置于冰浴上或冰盒内。 2.参考下表设置反应体系(以 20μl 体系为例)： | Component | Volume | Final Concentration | | Nuclease-free Water | 15.9 μl | - | | 10X Reaction Buffer | 2 μl | 1X | | DNA (0.5μg/μl) | 2 μl | 50 ng/μl | | Vaccinia DNA Topoisomerase I (10U/µl) | 0.1 μl | 0.05 U/µl | | Total | 20 μl | - |
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注：如果酶浓度过高，可适当使用本产品提供的 Storage Buffer 将酶适当稀释后再使用。 3.将上述配制好的反应体系置于 PCR 仪或水浴，37ºC 孵育 30min，然后放置冰上。 注：使用 PCR 仪孵育时，需要调整热盖温度为 40℃左右，避免在孵育过程中造成酶失活。 4.使用不含溴化乙锭(EtBr)的适当浓度的琼脂糖凝胶进行电泳，电泳结束后进行核酸染色和凝胶成像观察。 保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 注意事项： （1）当超螺旋质粒用 Vaccinia DNA Topoisomerase I 处理后，应使用不含溴化乙锭(EtBr，简称 EB)的琼脂糖凝胶进行电泳，必须在电泳完成后 再使用溴化乙锭或其它合适的核酸染料进行凝胶的核酸染色检测。因为当凝胶中含有溴化乙锭时，溴化乙锭会结合到 DNA 的碱基之间并催化形成 超螺旋。而在电泳结束后再进行染色，即使再次催化形成了超螺旋，也不会改变核酸片段的电泳位置了。 （2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 （3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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