本公司生产的 SP6 RNA 聚合酶 即 SP6 RNA Polymerase 是一种高度特异识别 SP6 启动子序列的 DNA 依赖的 5'→3' RNA 聚合酶。SP6RNA Polymerase 可以催化单链或双链 DNA SP6 启动子下游 NTP 的掺入，合成与 SP6 启动子下游的模板 DNA 互补的 RNA。
纯度（Purity）：不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶。
活性检测条件 （ Activity assayconditions）：40mM Tris-HCl, 6mM MgCl², 10mM DTT，2mM spermidine, 0.5mM NTP, 0.6MBq/ml[3H]-ATP, pH8.0, 20μg/ml plasmid DNA containing the specific SP6 RNA Polymerase promoter sequence。
组分和说明
| S750679 | Component | 1KU | 5*1KU | 25*1KU | 100*1KU | Storage | | S750679A | SP6 RNA Polymerase(20U/μl) | 50µl | 5*50µl | 25*50µl | 100*50µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | S750679B | 10X SP6 Transcription Buffer | 100µl | 5*100µl | 25*100µl | 100*100µl | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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产品应用
用于 RNA 合成，合成的 RNA 可以用于或用作：杂交探针，基因组 DNA 序列分析，核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay)，反义 RNA 合 成，作为体外翻译的 RNA 模板，RNA 剪接研究的底物，RNA 二级结构和 RNA-蛋白质相互作用，核酸扩增分析，siRNA、miRNA 等小 RNA。
产品优势
SP6 RNA Polymerase 不仅可以进行常规的 RNA 合成，还可以识别修饰的 NTP，例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的 NTP，可以用于各 种标记 RNA 的合成。同时对于 SP6 启动子有高度的特异性。
使用说明
1.RNA 合成：
a.DNA 模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
b.酚/氯仿抽提 DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的 DNA 纯化试剂盒，例如用 DNA 纯化试剂 盒，直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。
c.参考如下表格设置反应体系： | 10X SP6 Transcription Buffer | 2µl | | NTP Mixture (10mM each) | 4µl | | 线性 DNA 模板 | 0.4-1µg | | Ribonuclease Inhibitor (40U/µl) | 0.5µl | | SP6 RNA Polymerase (20U/µl) | 0.8-2µl | | 补充经 DEPC 处理的去离子水 | 至 20µl |
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d.按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
e.37℃孵育 1~2 个小时。
f.加入 2µl 0.5M EDTA (pH 8.0)到反应体系中混匀或-20℃冷却终止反应。
g.电泳分析转录产物，或通过其他适当方法鉴定转录的效率。
注意：
a)转录需在无 RNA 酶条件下进行。
b)反应体系需在室温条件下配置，4℃有亚精胺(spermidine)存在时 DNA 可发生沉淀。
c)按以上反应条件，每 1µg 模板 DNA 可合成超过 10µg 的 RNA。
d)如果模板 DNA 的线形化不太完全，会导致转录出比预期长度更长的 RNA，同时使预期长度的转录本比例下降。
e)可根据实际情况按照比例放大或缩小上述反应体系。
2.放射标记 RNA 的合成：
a.DNA 模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
b.酚/氯仿抽提 DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的 DNA 纯化试剂盒，例如 DNA 纯化试剂盒， 直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。
c.参考如下表格设置反应体系： | 10X SP6 Transcription Buffer | 2µl | | 3 NTP Mixture (10mM each , without CTP) | 1µl | | 100µM CTP | 2.4µl | | [α-32P]-CTP, ~30TBq/mmol(800Ci/mmol) | 1.85MBq(50µCi) | | 线性 DNA 模板 | 0.2~1µg | | Ribonuclease Inhibitor (40U/µl) | 0.5µl | | SP6 RNA Polymerase (20U/µl) | 1-2µl | | 补充经 DEPC 处理的去离子水 | 至 20µl |
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d.37℃孵育 1~2 个小时。
e.-20℃冷却终止反应。
f.分析和检测 RNA 的标记效率。
注意：
a)按以上方法合成的 RNA 活性一般为 3-5 x10⁸ dpm/µg。
b)上述标记反应中也可以使用[32 P]、[35 S]或[3H]标记的其他 NTP。使用其他放射性标记的 NTP 时，其他的 NTP 需作相应调整。20µl 反应体系各成分推荐使用剂量分别为：1.85MBq (50µCi) 5'-[α-32P]-CTP, ~30TBq/mmol(800Ci/mmol)；11.1MBq (300µCi) 5'-[α -35S]-UTP, >37TBq/mmol (>1000Ci/mmol)；0.925MBq (25µCi) 5,6-[3H]-UTP, 1.1-2.2TBq/mmol (30-60Ci/mmol)。 c)放射性标记 NTP 浓度低于 12µM 时，全长转录本合成效率也会下降。
保存条件： -20℃保存，≤0℃运输
注意事项：
（1）酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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