pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(GlutathioneS-transferasetag,GSTtag)或C端含His标签(Histag)的重组蛋白的原核表达质粒，也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白，使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点，可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列，后面有一个His标签的编码序列，后者含有6个组氨酸(6XHis)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子，这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS，对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。通常可以采用如GST-tagPurificationResin、GST标签蛋白纯化试剂盒、His-tagPurificationResin或His标签蛋白纯化试剂盒等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体和His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下：pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱如下：pET-N-GST-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：pET-N-GST-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息：D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt。不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：http://www.aladdin-e.com/

注意事项：

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