PreScissionProtease是一种大肠杆菌中重组表达的带GST标签的人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV) type143Cprotease)，也称HRV3CProtease或HRV3CProtease，能在低温条件下(4°C)特异性地识别八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或核心五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的GlutathioneS-transferase、His或者其它标签的蛋白酶。建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入PreScissionProtease专一性识别与酶切的上述八肽序列，这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有两个额外的Gly-Pro氨基酸残基，从而最大限度地减少了对其结构和功能的影响。本PreScissionProtease带有GST标签，特别适合用于GST标签蛋白的在柱酶切。在切割GST标签蛋白的时候，切下的GST标签和PreScissionProtease可结合于GST纯化柱上，而目的蛋白在穿透液中，这样洗脱下来的蛋白中就不会含有GST标签和PreScissionProtease，从而极大地方便了目的蛋白的纯化。GST标签酶切去除的详细说明可以参考阿拉丁的P2251/P2253/P2255GST-tagPurification Resin和P2262 GST标签蛋白纯化试剂盒的说明书。酶活性单位定义：5°C反应16小时，能够切割100μg GST标签蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。阿拉丁PreScissionProtease酶活性鉴定结果可参考图1。图1.PreScissionProtease切割GST标签蛋白的效果图。含有PreScissionProtease识别位点的56kDGST标签蛋白与PreScissionProtease进行反应，底物的用量为100μg，酶的用量依次为0、0.25、0.5、1、2、4U，5°C在1XPreScissionBuffer中反应16小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约30kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。PreScission Protease分子量大小约46 kDa，纯度≥95%。PreScission Protease储存液组成为：50mM Tris-HCl，150mM NaCl，10mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v) glycerol，pH 8.0。10X PreScission Buffer组成为：500mM Tris-HCl，1.5M NaCl，10mM EDTA，10mM DTT，pH 7.5。PreScission Protease的酶切体系中可以兼容1% Triton X-100、Tween-20或NP-40，10mM EDTA和500mM NaCl。本产品一个包装含有100单位的酶，可用于约10mg带有PreScission Protease识别位点的融合蛋白的切割。

注意事项：

100mM ZnCl2、4mM AEBSF和100μM Chymostatin会抑制PreScission Protease的酶活性50%以上。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。