阿拉丁生产的IdeZ Protease (IgG-specific)，即Immunoglobulin-degrading Enzyme from Streptococcus Equi Subspecies Zooepidemicus Protease，也称免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶，是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种免疫球蛋白IgG降解酶(Immunoglubulin G-degrading enzyme)。IdeZ Protease具有极高的底物特异性，仅能识别人等特定种属和特定类型的IgG，并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F"2', "片段和Fc片段(参考图1)。IdeZ Protease作为工具酶主要应用于抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析，制备仅包含F"2片段的抗体或抗体的Fc片段，也可用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。图1. IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人IgG的效果示意图。IdeZ Protease酶切后，在非还原性和非变性条件下可以产生100kD的F"2', "和50kD的Fc；如果在变性和还原性条件下会产生2个25kD的Fd'片段，2个25kD的LC片段和2个25kD的Fc/2片段。酶切过程中或非酶切过程中都可使用"PNGase F 对抗体进行去糖基化。IdeZ Protease可有效切割人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，还可以切割兔、大鼠、猴、绵羊(Sheep)、人源化和嵌合的IgG以及Fc融合蛋白，如Enbrel 1]。但IdeZ Protease不能切割小鼠IgG1/IgG2b，猪、牛或山羊IgG，以及非IgG同种型免疫球蛋白，包括IgA、IgM、IgD和IgE。与IdeS Protease相比，IdeZ Protease对大鼠、小鼠IgG2a和IgG3的酶切活性显著提高。阿拉丁生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人、兔和驴IgG的效果参考图2。图2. 阿拉丁生产的IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) 用于切割人、兔和驴IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中，加入10μg人、兔和驴IgG ，再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品，然后用超纯水补至25µl，37℃孵育30分钟进行酶切。反应结束后，立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) ，进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色，拍照观察结果。实验结果表明，本产品对人和兔IgG具有明显的切割效果，并且对于兔IgG有非常高的酶活性，但不能特异性识别与切割驴IgG。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。阿拉丁生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割大鼠IgG的效果参考图3。图3. 阿拉丁生产的IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) 用于切割大鼠IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中，加入10μg大鼠IgG ，再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品，然后用超纯水补至25µl，37℃孵育120分钟进行酶切。反应结束后，立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) ，进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色，拍照观察结果。实验结果表明，本产品能识别并切割大鼠IgG，但酶切效率相对较低，需要增加使用酶量或延长反应时间才能达到充分切割的目的。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。本产品具有良好的酶切活性并含有His标签，在酶切完成后可以使用镍柱很容易地从酶切反应体系中分离去除含有His标签的IdeZ Protease。分子量：约为33kDa。

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