碧云天生产的酵母菌落PCR试剂盒(酶解法)，英文名为Yeast Colony PCR Kit by Enzymatic Lysis，是一种非常便捷的用于酿酒酵母、毕赤酵母等菌株在质粒转化后阳性克隆菌落的PCR筛选和鉴定的试剂盒。

本试剂盒提供了Yeast Lysis Enzyme用于消化酵母细胞壁，并提供了Yeast Colony PCR Mix (Green, 2X)用于进行PCR扩增。Yeast Colony PCR Mix (Green, 2X)是含有蓝色和橙色染料(电泳位置分别约4kb和50bp)的2倍浓度的PCR预混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer等，用户只需加入酵母菌落裂解液、引物和水即可进行PCR扩增，并且扩增完毕后可以直接上样电泳。

酵母是一种经典的真菌模式生物，被广泛用于细胞生物学、遗传学、衰老等方面的研究。同时酵母作为真核生物具有较快的生长速度、成熟的翻译后修饰系统和抗性筛选系统，在分子生物学研究中常常被用作动植物蛋白表达和互作的异源宿主检测系统。在酵母中进行基因操作时，为确保其准确性，需对DNA片段的引入或删除进行鉴定，常规步骤包括单菌落扩增培养、收集并裂解细胞、提取高纯度DNA模板及PCR检测[1]，在进行大规模筛选工作时，该方法往往成本高且效率低。菌落PCR无需预先分离或纯化DNA，而是直接以菌体或菌体裂解液为模板来完成靶标序列的扩增，相对而言比较快速高效。

酵母细胞的细胞壁主要成分为多糖(85%-90%)和蛋白质(10%-15%)，其中多糖是由甘露聚糖、β-葡聚糖和少量的几丁质等组成，处于细胞壁内层的β-葡聚糖与几丁质共价相连，起到细胞骨架的作用；而外层的甘露聚糖与中层蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸以O-糖苷键相连接，形成的甘露糖蛋白覆盖于细胞表面，给予酵母细胞一定的韧性[2]。酵母细胞壁独特的结构致使其DNA难以被简单的PCR加热过程所释放，导致很多将酵母直接作为模板进行PCR检测的试剂盒成功率都比较低。

本试剂盒提供了Yeast Lysis Enzyme在PCR反应前对酵母进行有效预处理，可以充分降解酵母细胞壁并释放酵母DNA，能确保有效进行酵母菌落PCR，从而大大缩短酵母转化后阳性克隆鉴定的时间，提高实验效率。

本试剂盒使用非常便捷。本试剂盒中提供的Yeast Colony PCR Mix (Green, 2X)已经含有所有的通用组分，用户只需自备引物和水即可对酵母菌落进行PCR扩增。它大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好；同时Yeast Colony PCR Mix (Green, 2X)中已经包含了上样缓冲液组分，PCR扩增结束后即可直接上样电泳，无需添加上样缓冲液。

本试剂盒中提供了双色染料，便于电泳时观察电泳进程。本试剂盒中的Yeast Colony PCR Mix (Green, 2X)加入了蓝色和橙色的电泳示踪染料(整体呈现绿色)，其在浓度为1%琼脂糖胶中的迁移位置分别大约位于4kb和50bp处。PCR结束后可直接进行电泳检测，无需再添加上样缓冲液。蓝色和橙色示踪染料不会影响对相应DNA条带的观察和检测。