本产品为由Super Pfx DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及反应缓冲液组成的优化的2×预混型 试剂，只需要添加引物和DNA模板即可进行PCR反应。Super Pfx DNA Polymerase具有3´→5´外 切酶活性，其保真性约为Taq DNA聚合酶的100倍，是克隆的理想选择。该酶通过引入延伸增 强技术，在维持高保真性的同时，实现了延伸速度10sec/kb的高速PCR，扩增长度可达20kb。 此外，本产品在兼具高成功率的同时，对于扩增反应困难的长片段、GC-rich区域和过量模板 也可以进行扩增。扩增得到的PCR产物的3´端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。 本产品分为不含Loading Dye的标准型2×Master Mix和含有Loading Dye 的2×Master Mix。 

保存条件：-20℃保存。 

产品内容

产品特征

1. 可进行高速PCR

扩增1kb以下的目的片段时，延伸时间可设为10sec。扩增1-10kb的目的片段时，延伸时间可 设为20-30sec/kb。相比以往试剂可大幅度缩短PCR的反应时间。

2. 高保真性  

保真性约为Taq DNA polymerase的100倍，长目的片段也可以迅速且高保真性地扩增，扩增产 物可用于多种用途。 

3. 简便

本试剂中包含所有除引物、模板以外的其他PCR组分，便于操作的同时也提高了实现结果的重 现性。另外，2×Super Pfx Master Mix（Dye）中含有 Loading Dye，反应 结束后，可直接点样进行凝胶电泳。  

注意事项

带有尿嘧啶的引物和模板不适用于本产品。

使用说明  

PCR反应体系

1. 反应液制备前，请将试剂完全融解、混匀后再使用。

・组分添加完后请混合均匀并迅速转移到PCR仪里。 

・引物终浓度推荐为0.4-0.5μM，但扩增10kb以上的长片段时，引物终浓度为0.3μM可提高扩增产物量。

  PCR反应程序

 1. 反应液制备前，请将试剂完全融解、混匀后再使用。

注意：

1）预变性：对于多数纯化后的模板，98℃，30sec即可；对于复杂模板可延长预变性时间，不超3min。 

2）退火：一般实验中退火温度比引物Tm低3-5℃，发生非特异性反应时，适当提高退火温度。如果需要， 可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。对于高Tm的引物，可以使用两步循环，将退火和 延伸合并为一步。 

3）延伸：对于复杂的基因组样本，延伸时间通常为20-30sec/kb，但对于简单模板(质粒、大肠杆菌等)或 ＜1kb的复杂模板，延伸时间可缩短至10sec/kb。如果需要，cDNA或＞6kb的复杂模板，延伸时间可以增 加到40-50sec/kb。

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