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  • Es Taq DNA Polymerase
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  • Es Taq DNA Polymerase

    实验室试剂
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  • 所属类别:实验室试剂
  • 产品品牌:阿拉丁
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商品描述


品牌货号


别名

阿拉丁E665597


Es Taq DNA聚合酶

规格或纯度EnzymoPure™, 500 U
英文名称Es Taq DNA Polymerase
储存温度-20°C储存,避免反复冻融
运输条件超低温冰袋运输
产品介绍

Es Taq DNA Polymerase是Taq与Pfu DNA Polymerase的优化混合酶，具有5′→3′DNA聚合酶活性、5′→3′ 外切酶和3′→5′ 外切酶活性。与Taq DNA Polymerase相比，Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能，能高效率扩增DNA片段。使用本品扩增得到的大部分PCR产物3′ 端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本产品适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等反应。

E665597Component500 UStorage
E665597AEs Taq DNA Polymerase, 5 U/μL 100 μL  -20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
E665597B10×PCR Buffer    1.8 mL -20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

活性定义：

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧 核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。  

质量控制：

经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一 个月，无明显活性改变。

使用方法：

以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。  

1. PCR反应体系

试剂50 μl反应体系终浓度
10×PCR Buffer5 μL1×
dNTP Mix，10 mM each1 μL200 μM each
Forward Primer，10 μM2 μL0.4 μM
Reverse Primer，10 µM2 μl0.4 μM
Template DNA<0.5 μg<0.5 μg/50 μl
Es Taq DNA Polymerase，5 U/μl0.25-0.5 μl1.25-2.5U/50 μl
ddH2Oup to 50 μL/


注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高 引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2. PCR反应条件  

步骤温度时间/
预变性94℃2 min/
变性94℃30 s25-35 个循环
退火55-65℃30 s25-35 个循环
延伸72℃30 s25-35 个循环
终于延伸72℃2 min/

注意： 

1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降 低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。 

2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。 

3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太 多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


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