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  • Taq DNA Polymerase
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    实验室试剂
    阿拉丁
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  • 所属类别:实验室试剂
  • 产品品牌:阿拉丁
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商品描述


品牌货号


别名

阿拉丁T665586


Taq DNA聚合酶

规格或纯度EnzymoPure™
英文名称Taq DNA Polymerase
储存温度-20°C储存,避免反复冻融
运输条件超低温冰袋运输
产品介绍

Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermusaquaticus polymerase。该蛋白分子量为94 kDa,具有5′→3′ DNA聚合酶活性和5′→3′外切酶活性,无3′→5′外切酶活性,酶延伸速度2 kb/min,可以扩增长度达5 kb的片段。扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点,主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

T665586Component500 U2500 U10 KUStorage
T665586ATaq DNA Polymerase, 5 U/μL100 μL5×100 μL2×1 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
T665586B10×PCR Buffer1.8 mL5×1.8 mL8×5 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
Notes: 10×PCR Buffer contains 15mM Mg2+.

活性定义: 

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧 核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制:

经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;经检测无外源核酸酶活性; PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一 个月,无明显活性改变。  

使用方法:

以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1. PCR反应体系  

试剂50 μl反应体系终浓度
10×PCR Buffer5 μl
dNTP Mix,10 mM each1 μl200 μM each
Forward Primer,10 μM2 μl0.4 μM
Reverse Primer,10 μM2 μl0.4 μM
Template DNA<0.5 μg<0.5 μg/50 μl
Taq DNA Polymerase,5 U/μl0.25-0.5 μl1.25-2.5 U/50 μl
ddH2Oup to 50 μl/

注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引 物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。

2. PCR反应条件  

步骤温度时间/
预变性94℃2 min/
变性94℃30 s25-35 个循环
退火55-65℃30 s25-35 个循环
延伸72℃30 s25-35 个循环
终于延伸72℃2 min/

注意: 

1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降 低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。 

2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。 

3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太 多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


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