产品说明

Whole Blood polymerase是一种高性能血液直扩PCR产品，抵抗较高浓度的血液（EDTA、肝素、柠檬酸钠）、SDS、NaCl等的抑制作用。 即使在PCR增强剂不存在的情况下以及在其他商业酶失效的某些浓度的血液样品中，其通常仍然在40％全血（50μl体系）PCR中起作用。在PCR增强剂的存在下扩增效果会更好。 它能够在PCR之前直接从全血扩增，而无需DNA纯化，可热启动，产量高。来自菲鹏的这种新型热启动酶制剂配有5× WB buffer（with Mg2+），这是一种专有反应buffer，组分中含有2×Enhancer，初次实验建议先不加Enhancer，若扩增效果较差，再加入Enhancer进行调试。

产品内容

Whole Blood polymerase ( 5U/μl )

5×WB buffer

Enhancer（2×）

来源 : 来源于重组E.coli 菌株，携带有突变后的Taq酶基因，该基因去除了5´→3´ 核酸外切酶结构域。

热失活：75℃热处理 20min。

注意事项

需要注意的是，Whole Blood polymerase 含有一定的校正活性，扩增后的产物为平末端，用于 TA 克隆前，需要将扩增产物进行纯化后加 A 尾。

 
体系配制（25μl）

质量控制分析

1)单位特性分析：单位活性是用2倍连续稀释法测定。稀释的酶液用含Whole Blood polymerase 的50%甘油的储存液制备，添加到包含小牛胸腺DNA，1×Whole Blood polymerase, 3H-dTTP和100 µM dNTPs的50μl反应体系中，37℃温育10min，放置冰上进行测定。

2)蛋白质浓度(OD280 )测定：用 OD280 吸光法测定。

3)物理纯度测定：用浓缩和稀释的酶溶液进行SDS-PAGE 凝胶电泳之后，用银染色法检测，通过浓缩样品聚集的杂质条带和稀释样品蛋白的目的条带来评定蛋白纯度。

污染测试

1) 单链核酸外切酶活性：50μl 反应体系中加入放射性标记的单链 DNA 底物和 10μl 酶溶液，37℃温育 4 小时测定，释放 TCA-可溶数量大于 50.0%。

2) 双链核酸外切酶活性：50μl 反应体系中加入放射性标记的双链 DNA 底物和 10μl 酶溶液，37℃温育 4 小时测定，释放 TCA-可溶数量大于 50.0%。

3) 双链核酸内切酶活性：50μl 反应体系中加入 0.5ug Pbr322 质粒 DNA 和 10μl 酶溶液，37℃温育 4 小时进行琼脂糖凝胶电泳，无明显可见的带缺口的环状 DNA。

4) E.coli 16S rDNA  污染测定：用 5μl 经过变性和筛选的复制样品酶溶液和用与 16S rRNA 位点一致的寡核苷酸引物进行TaqMan qPCR 来检测污染的大肠杆菌基因组。