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HiFiScript gDNA 去除 cDNA 合成试剂盒

产品简介 

本产品是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2分钟即可 除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转 录酶HiFiScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA**链合成的效率和产 量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA**链。如逆转录产物cDNA用于下 游荧光定量检测，可在42℃，15分钟完成逆转录反应。本试剂盒适用于**链cDNA 的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

产品特点 

1．快速去除基因组：含有去除基因组DNA的gDNA Eraser，只需2分钟即可除去基因 组DNA。 

2．快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA**链合成。 

3．灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA**链。 

4．高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项

1．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人 员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。 

2．逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于 -20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。 

3．反应体系可倍比放大，10 μl反应体系可最大使用1 μg总RNA。 

4．Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用 Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。 

5．若起始RNA的量小于50 ng，建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。

6．对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分 钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

使用方法 

将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶 液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应 

1．根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10 μl。为了保证反应液配制的准确性，先 按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，最后加入RNA样品。

  注意：1） 如果总RNA量大于1 µg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。 

2．涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 

3．42℃孵育2分钟（室温反应时，可以延长到30分钟）。 

4．反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1．根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的 准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10 μl到每个反应管中，取配制的 预混液10 μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。 

注意：1） 可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20 μl 反应体系 Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。 

2．混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 

3．cDNA合成反应条件： 

1）若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。 

2）若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。 注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。 

4．反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时 间保存，请置于-20℃。 

注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。