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  • GoldStar DNA Polymerase
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  • GoldStar DNA Polymerase

    实验室试剂
    阿拉丁
    2000-5000
    • ￥599.90-2157.90
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商品参数
  • 所属类别:实验室试剂
  • 产品品牌:阿拉丁
  • 价格区间:2000-5000
商品描述


品牌货号


别名

阿拉丁G665840


GoldStar DNA聚合酶

规格或纯度EnzymoPure™
英文名称GoldStar DNA Polymerase
储存温度-20°C储存,避免反复冻融
运输条件超低温冰袋运输
产品介绍

GoldStar DNA Polymerase是一种经化学修饰、全新高效的Taq DNA Polymerase， 在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在 常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活 须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级 结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增。用本品进行PCR扩增，PCR产物3'末端 附有一个“A”碱基，可直接用于T/A 克隆。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去 除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR、 Real-time PCR、多重PCR、基因芯片分析和SNP检测，特别适用于对特异性要求较高 的PCR反应。

G665840Component500 U2500 UStorage
G665840AGoldStar DNA Polymerase, 5 U/μL100 μL 5×100 μL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
G665840B5×GoldStar PCR Buffer1.9 mL 5×1.9 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.


注意：本产品的5×GoldStar Taq PCR Buffer中含有8.5mM镁离子。

单位定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧 核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。 

质量控制

SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主 残留DNA；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。室温存放一个月，无明显活性改变。 

使用方法

以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。 

1. PCR反应体系  

试剂50 μl反应体系终浓度
5×GoldStar PCR Buffer10 μl1 ×
dNTP Mix，10 mM each1 μl200 μM each
Forward Primer，10 μM2 μl0.4 μM
Reverse Primer，10 μM2 μl0.4 μM
Template DNA<0.5 μg<0.5 μg/50 μl
GoldStar DNA Polymerase，5 U/μl0.5 μl2.5 U/50 μl
ddH2Oup to 50 μl/

注意：引物浓度，请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提 高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2. PCR反应条件

步骤温度时间/
预变性95℃10 min/
变性95℃30 s30-40 个循环
退火55-65℃30 s30-40 个循环
延伸72℃60 s30-40 个循环
终延伸72℃5 min/

注意： 

1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理 想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条 件。 

2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar Taq DNA Polymerase的扩 增效率为1-2 kb/min。 

3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太 多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。 

4）本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。


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