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产品简介

本试剂盒适合提取1-5 ml菌液，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA，并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项

1. 所有组分可在干燥、室温（15-30℃）环境稳定保存1年，将吸附柱置于2-8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。

2. **次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。

3. **次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

4. 使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清（请勿剧烈晃动Buffer P2）。

5. 注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。

6．提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤

1. 取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管（自备）中，13,000 rpm（~16,200×g） 离心30 秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入250 μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4-6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。

4. 向离心管中加入350 μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8-10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13,000 rpm离心5分钟。

注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。

5. 将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，13,000 rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入150 μl Buffer PB，13,000 rpm离心30秒。

7. 向吸附柱中加入400 μl Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

8. 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位加入50-100 μl Buffer EB，室温放置2分钟，13,000 rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃ 保存质粒。

注意：1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，13,000 rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。

2) 质粒拷贝数较低或>10 kb时， Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。