产品内容 | S666146 | Component | 50 T | 200 T | Storage | | S666146A | Buffer GR | 25 mL | 120 mL | RT | | S666146B | Buffer GL | 25 mL | 120 mL | RT | | S666146C | Buffer GW1 (concentrate) | 13 mL | 52 mL | RT | | S666146D | Buffer GW2 (concentrate) | 15 mL | 75 mL | RT | | S666146E | Buffer GE | 15 mL | 60 mL | RT | | S666146F | Proteinase K | 1.25 mL | 4×1.25 mL | RT | | S666146G | Spin Columns DS with Collection Tubes | 50 sets | 200 sets | RT | | S666146H | Centrifuge Tubes (1.5 mL) | 50 EA | 200 EA | RT |
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产品简介
本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总DNA的方法。该试剂盒采用可特异性结合DNA的硅基质膜和独特的缓冲系统，高效专一吸附DNA，每个拭子可得到0.5-3.5 μg基因组DNA，提取的DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 自备试剂：无水乙醇。 实验前准备及重要注意事项 1. **次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。 2. 使用前若发现Buffer GL有沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴溶解。 3. 全部离心步骤可在室温下进行。 4. 取样：使用口腔拭子在口腔内壁擦拭6次，晾干2小时保存，为确保样本不被食物或 饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。 操作步骤 1. 将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下，置于2 mL的离心管（自备）中，加入400 μL Buffer GR。 注意：如需无RNA污染的基因组DNA，可加入4 μL浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液震荡混匀。 2. 加入20 μL Proteinase K 和 400 μL Buffer GL，立即涡旋震荡15秒，充分混匀。 注意：加入Buffer GL后立即充分混匀；不可将Proteinase K直接加入Buffer GL中使用。 3．56℃放置10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 4. 加入400 μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。 5. 将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附 柱（Spin Columns DS） 中，一次最多不超过700 μL 。12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 6. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 7. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。 8．12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 9．将吸附柱置于一个新的1.5 mL离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50 μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存。 注意： 1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值 低于7.0时洗脱效率不高。 2）若需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。 | 
