产品内容 | B669892 | Component | 50 T | Storage | | B669892A | Buffer RCL | 3×260 mL | 2-8℃ | | B669892B | Buffer GR | 25 mL | RT | | B669892C | Buffer GL | 25 mL | RT | | B669892D | Buffer GW1 (concentrate) | 13 mL | RT | | B669892E | Buffer GW2 (concentrate) | 15 mL | RT | | B669892F | Buffer GE | 15 mL | RT | | B669892G | Proteinase K | 50 mg | RT | | B669892H | Proteinase K Storage Buffer | 5 mL | RT | | B669892I | Spin Columns DL with Collection Tubes | 50 sets | RT |
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产品简介 本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理1-5 ml的全血，可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。 自备试剂：无水乙醇。 实验前准备及重要注意事项 1. 向Proteinase K中加入5ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。 2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。 3. 本试剂盒最多可以提取1-5ml全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组非柱式提取试剂盒。 4. **次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。 5. 使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水浴重新溶解。 6. 如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4μl DNase Free的RNase A（100 mg/ml）， RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购。 7. 试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。 操作步骤 1．向离心管（自备）中加入1-5 ml血液样品，加入3倍体积的Buffer RCL轻轻涡旋或颠倒混匀。 2．3000 rpm（～900 x g）离心10分钟，小心吸弃上清。 3．向沉淀中加入400 μl Buffer GR，重悬沉淀。 注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。 4．1-2 ml血液样本提取时,向以上溶液中加入40 μl Proteinase K，混匀；2-5ml血液样本提取时,向以上溶液中加入100 μl Proteinase K，混匀。 5．加入400 μl Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。 注意：不要直接将Proteinase K直接加入到Buffer GL中。 6．70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。 注意：1）如溶液未彻底清亮，补加适量Proteinase K，孵育。延长孵育时间至溶液完全清亮为止。 2）孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。 7. 加入400 μl无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。 8. 将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DL）中， 若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 9. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。 10. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。 11.12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等） 12.将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE 或灭菌水，室温下放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。 2） 离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。 3） 用另外的50-200 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。 4） 如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，12,000 rpm离心 1min；若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。 5） 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。 | 
