产品简介

该试剂盒提供了一种简单、高效的植物DNA提取方案。植物细胞经物理方法破碎后，裂解产 物中的DNA在高盐存在时结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后， DNA被洗脱于Buffer TB或去离子 水中。提取得率与样品类型以及细胞破碎效果有很大关系，提取得到的DNA可用于二代测序、 PCR检验等下游实验。

自备仪器、试剂

1.   CWE2100或CWE9600

2.   96 DW Plate, 8 tip Com, Spin tips pack

3.   无水乙醇

实验前准备以及注意事项

1.   **次实验前按照试剂瓶标签上的说明向Buffer GW1中加入指定用量的无水乙醇； 

2.   客户需配置75%乙醇用于漂洗；

3.   Magbeads PN严禁冰冻、高速离心。冰冻、高速离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。

 操作步骤

手动操作

1.   植物材料的破碎：

方案1：

1)称取经液氮充分研磨好的新鲜植物样品粉末约50-100 mg或干燥样品粉末约30 mg，迅速转 移到预先装有400 µL Buffer PLS和5 µL RNase A（10 mg/mL）的离心管中，迅速颠倒混匀 后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使其终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案2：

1）向2.0 mL离心管中加入50 -100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料； 

2）用液氮速冻后用玻璃将植物材料充分研磨至粉状；

向离心管中加入400 μL Buffer PLS和5 µL RNaseA（10 mg/mL），迅速颠倒混匀后置于恒温 混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使其 终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案3：

1）向2.0 mL离心管中加入50 -100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料；

2）向离心管中加入400 μL Buffer PLS、5 μL RNaseA (10 mg/mL)和1颗钢珠，之后立即将离 心管固定于组织破碎仪中震荡破碎；

3）将离心管从组织破碎仪中取出后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。 

2.    12,000 rpm (~13,400×g)离心4 min后，转移全部上清至新的1.5 mL离心管中。

3.    向1.5 mL离心管中加入550 μL BufferZB和20 µL Magbeads PN，颠倒混匀30 s，瞬时离心， 室温静置5 min，其间颠倒混匀数次。

4.   瞬时离心，将离心管转移至磁力架吸附1min（直至溶液澄清），之后弃去溶液，期间避免接 触磁珠。

5.   将离心管从磁力架上取下，加入650 µL Buffer GW1，涡旋混匀10 s，重悬磁珠，之后将离心管 固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2 min或涡旋震荡1 min。

6.   将离心管固定于磁力架上静置1 min，之后充分弃去溶液；

7.   重复步骤5-6；

8.   将离心管从磁力架上取下，加入650 µL 75%乙醇，涡旋混匀10 s，重悬磁珠，之后将离心管固 定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2 min或涡旋震荡1 min。

9.   将离心管固定于磁力架上静置1 min，之后充分弃去溶液

10. 重复步骤8-9；

11. 将离心管短暂离心后用移液器再次去除管底溶液，之后室温放置5-10 min 使乙醇充分挥发；  12. 向离心管中加入100   μL   Buffer   TB，涡旋震荡时磁珠充分悬浮与洗脱液中后将其放于65℃、

1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟，或在65℃水浴锅中孵育10 min，期间涡旋震荡4次。

13. 将离心管固定于磁力架上静置2 min，待磁珠充分吸附于离心管侧壁后将洗脱液转移至新的离

心管中-20℃保存备用。

与CWE2100匹配

1.   植物材料的破碎：

方案1：

1)称取经液氮充分研磨好的新鲜植物样品粉末约50-100mg或干燥样品粉末约30mg，迅速转 移到预先装有400 µL Buffer PLS和5 µL RNase A（10 mg/mL）的离心管中，迅速颠倒混匀后， 瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使其终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案2：

1) 向2.0 mL离心管中加入50 -100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料； 

2) 用液氮速冻后用玻璃将植物材料充分研磨至粉状；

3) 向离心管中加入400 μL Buffer PLS和5 µL RNaseA（10 mg/mL），迅速颠倒混匀后置于恒 温混匀仪70℃, 1600 rpm ，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入β巯基乙醇，使 其终浓度为5%，可提高核酸提取效果）

方案3：

1) 向2.0 mL离心管中加入50-100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料；

2) 向离心管中加入400 μL Buffer PLS、5 μL RNase A (10 mg/mL)和1颗钢珠，之后立即将离 心管固定于组织破碎仪中震荡破碎；

3) 将离心管从组织破碎仪中取出后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600rpm ，10 min。 2.   12,000 rpm (~13,400×g)离心4 min后，转移全部上清至96 DW深孔板中；

3.   按下表向96 DW深孔板中加入试剂：

4.   将96 DW深孔板以及磁棒套放于CWE2100仪器中，运行Cowin Plant程序。

5.   约50 min后程序运行结束，取出深孔板与磁套。将6&12列中的裂解产物转移至1.5 mL离心管 中-20℃保存备用。

与CWE9600匹配

1.   方案1：

1) 称取经液氮充分研磨好的新鲜植物样品粉末约50-100  mg或干燥样品粉末约30 mg，迅速转 移到预先装有400  µL  Buffer  PLS和5  µL  RNase  A（10  mg/mL）的离心管中，迅速颠倒混匀 后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600 rpm，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS 中加入5% β巯基乙醇，可提高核酸提取效果）

方案2：

1) 向2.0 mL离心管中加入50-100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料；

2) 用液氮速冻后用玻璃将植物材料充分研磨至粉状；

3) 向离心管中加入400 μL Buffer PLS和5 µL RNase A（10 mg/mL），迅速颠倒混匀后置于恒 温混匀仪70℃, 1600rpm，10 min。（提取多糖多酚植物在Buffer PLS中加入5% β巯基乙醇， 可 提高核酸提取效果）

方案3：

1) 向2.0 mL离心管中加入50-100 mg新鲜植物材料或20 mg干燥植物材料；

2) 向离心管中加入400 μL Buffer PLS、5 μL RNase A (10 mg/mL)和1颗钢珠，之后立即将离 心管固定于组织破碎仪中震荡破碎；

3) 将离心管从组织破碎仪中取出后，瞬时离心，置于恒温混匀仪70℃, 1600  rpm ，10  min。 

2.   12,000 rpm (~13,400×g)离心4 min后，转移全部上清至96 DW深孔板中；

3.   按下表向96 DW深孔板中加入试剂：

4.   将96 DW深孔板以及磁棒套放于CWE9600仪器中，运行程序。

5.   约50  min后程序运行结束，取出深孔板与磁套。将Plate  6中的裂解产物转移至1.5  mL离心管 中-20℃保存备用。