阿拉丁生产的Lambda Exonuclease，即λ Exonuclease，λ核酸外切酶或Lambda核酸外切酶，是一种特异性作用于DNA的5´→3´核酸外切酶，能选择性地沿5´→3´方向消化5’端磷酸化的双链DNA，对单链DNA和5’端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低，不能从DNA的切刻或缺口处起始消化1, 2]。 Lambda Exonuclease对5´-0H端的切割速度比5´-P端慢约20倍；对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。Lambda Exonuclease是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。阿拉丁生产的Lambda Exonuclease对一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图1。图1. 阿拉丁生产的Lambda Exonuclease 对仅一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中，加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(其中一条核酸链带有5´磷酸化修饰，另一条链无5´磷酸化修饰)，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液，180V电泳40分钟，之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。阿拉丁生产的Lambda Exonuclease对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果参考图2。图2. 阿拉丁生产的Lambda Exonuclease 对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中，加入10pmol 26nt单链线性DNA片段(5´磷酸化修饰)，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液，180V电泳40分钟；之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的单链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。阿拉丁生产的Lambda Exonuclease对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图3。图3. 阿拉丁生产的Lambda Exonuclease 对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中，加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(无5´磷酸化修饰)，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液，180V电泳40分钟；之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，均不能有效的消化无5´磷酸化修饰的双链线性DNA。图中效果仅供参考。

用途：

生成单链PCR产物用于DNA测序；DNA单链构象多态性(SSCP)分析；滚环扩增；从双链DNA片段生成单链DNA；PCR产物的克隆；质粒制备净化。

来源：

纯化自携带编码大肠杆菌Lambda核酸外切酶基因的E.coli重组菌株。

酶储存溶液：

25mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, (pH8.0 @25℃)。10X Reaction Buffer: 670mM Glycine-KOH, 25mM MgCl2, 500µg/ml BSA, (pH9.4 @25℃)。

失活或抑制：

加入EDTA至终浓度为至少10mM，75℃孵育10分钟可使Lambda Exonuclease失活。

注意事项：

Lambda Exonuclease的**反应温度是37℃，在75℃条件下孵育10分钟可使其完全失活。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。