pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种可以带上GST标签(GlutathioneS-transferasetag,GSTtag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到**个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与**个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用阿拉丁生产的PreScission Protease 4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在**个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下：pET-Dual-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括：pET-Dual-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括：pET-Dual-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下：MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′ MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息：D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt。不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：http://www.aladdin-e.com/

注意事项：

使用说明：