碧云天生产的酿酒酵母AH109甘油菌(Saccharomyces cerevisiae AH109 Yeast Glycerol Stock)是取对数生长期的酿酒酵母AH109菌液，加入等体积30% (v/v)甘油制备而成。本甘油菌可以直接平板划线或小量、大量培养。

酿酒酵母是单细胞真核微生物，属于酵母属(Saccharomyces)酿酒酵母种(Saccharomyces cerevisiae)。酿酒酵母是一种被广泛研究和使用的真核生物模型，基因组约1.2×10⁷bp，细胞核内含有16条染色体，约6000个ORF，仅4%的酵母基因有内含子，遗传背景简单[1]。酿酒酵母具有类似原核生物的生长特性，便于培养和进行遗传操作，是一种模式真核生物，被称为真核生物的“大肠杆菌”。酿酒酵母能够以单倍体状态存在，更容易进行基因型表型分析，以及高效的同源重组，从而可以轻松编辑基因组序列，进行高通量遗传分析。酿酒酵母表达系统表达外源基因时具有一定的翻译后加工能力，收获的外源蛋白质在一定程度上进行了折叠加工和糖基化修饰，有利于保持蛋白的活性和稳定性，并且外源基因可在酿酒酵母中可以分泌表达，表达产物分泌至胞外不仅有利于纯化，还避免了产物在胞内大量蓄积[2]。

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白质相互作用的一种非常便利的方法，常用的酵母双杂交系统是以GAL4为基础的双杂交系统，通过酵母转录因子GAL4的转录激活来检测蛋白质的相互作用。其工作原理是：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域组成，分别为由GAL4 N端一个147个氨基酸(1~174位氨基酸)组成的DNA结合域(DNA-binding domain, DNA-BD)和GAL4 C端一个113个氨基酸(768~881位氨基酸)组成的转录激活域(Activation domain, AD)。BD可以识别并结合上游激活序列(Upstream activating sequence, UAS)，单独的BD或AD都不能激活转录；当分开的AD和BD通过适当的途径在空间上较为接近时，重新呈现完整的GAL4转录因子活性，才可激活上游激活序列(Upstream activating sequence，UAS)的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。基于这个原理，将两个待检测的蛋白分别与BD和AD融合，并共表达于同一个酵母细胞内，形成诱饵融合蛋白(bait-DNA)和诱捕融合蛋白(prey-DNA)，如果诱饵蛋白和诱捕蛋白发生相互作用，促使AD和BD相互接近，通过检测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定，即可验证蛋白分子间是否发生了相互作用。

AH109是GAL4系统酵母双杂交常用的实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，将lacZ报告基因引入PJ69-2A从而产生了AH109。AH109是MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(Mating)操作进行蛋白质相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109的转化标记(Transformation marker)为trp1和leu2，报告基因为lacZ、HIS3、ADE2和MEL1。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。AH109的四个报告基因(lacZ、HIS3、ADE2和MEL1)分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列才能激活4个报告基因表达，所以可有效缩减假阳性发生的概率。

酿酒酵母AH109基因型：MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS-GAL1_TATA-HIS3, MEL1 GAL2_UAS-GAL2_TATA-ADE2, URA3::MEL1_UAS-MEL1_TATA-lacZ。

AH109酵母菌株对高温敏感，最适的生长温度是27-30ºC，温度超过31ºC不利于菌株的生长。

本甘油菌可以在复合培养基YPD或YPDA中生长。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择，可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/strain.htm

-80ºC保存，至少2年有效。须注意避免反复冻融。

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加酵母菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

酵母菌落或酵母菌体变粉是酵母细胞生长的一个常见现象，并非污染造成。当酵母细胞在固体平板或液体培养基培养时间过长时，培养基中的腺嘌呤(Adenine)被酵母消耗殆尽，酵母细胞试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用，但是有的菌株的ADE2基因被破坏导致腺嘌呤合成途径受阻，而其ADE4、ADE5、ADE6、ADE7和ADE8基因均正常，所以造成了腺嘌呤合成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在酵母细胞中累积从而导致菌落或菌体变为粉红色。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。