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  • pShuttle-CMV-C-Flag(腺病毒质粒)
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  • pShuttle-CMV-C-Flag(腺病毒质粒)

    实验室试剂
    碧云天
    0-2000
    • ¥888.00-1169.00
      ¥0.00
      ¥888.00-1169.00
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  • 所属类别:实验室试剂
  • 产品品牌:碧云天
  • 价格区间:0-2000
商品描述
产品编号产品名称产品包装产品价格
D8119-1μgpShuttle-CMV-C-Flag(腺病毒质粒)1μg888.00元
D8119-100μgpShuttle-CMV-C-Flag(腺病毒质粒)100μg1169.00元

pShuttle-CMV-C-FLag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端FLag tag(FLag标签)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后,需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。

pShuttle-CMV-C-FLag含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。

本质粒为卡那霉素抗性。

重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒,删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因,E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制,同时给外源基因的插入提供了空间,最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因,经过Pme I线性化,随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中,或者转化到已经预转化了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因,具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性,使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组,实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。

目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点,如果含有该两个酶切位点的目的基因,需要对该位点进行突变方可进行基因操作。

pShuttle-CMV-C-FLag质粒的主要信息如下:

Feature NucleotidePosition
left inverted terminal repeat1–103
encapsidation signal (ES)183–331
CMV promoter341–933
multiple cloning site940–994
FLag tag999-1025
SV40 polyA1045–1251
Ad5 right arm homology1256–3510
Ad5 left arm homology3558–4441
right inverted terminal repeat4442–4544
pBR322 origin4752–5419
kanamycin resistance ORF6228–7019


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