产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D8202-1μg | pLenti-H1(慢病毒小RNA表达载体, 绿色荧光) | 1μg | 888.00元 |
D8202-100μg | pLenti-H1(慢病毒小RNA表达载体, 绿色荧光) | 100μg | 1169.00元 |
pLenti-H1是一种碧云天自行研发的使用特别便捷的用于表达小RNA并同时表达绿色荧光蛋白GFP的重组慢病毒载体。该载体可以用于表达siRNA (small interference RNA),也称RNAi (RNA interference),或用于表达microRNA等其它小RNA。一方面,该载体可用于和pCMV-VSVG质粒(D8215)及pCAG-dR8.9(delta8.9,Δ8.9)(D8216)共同转染HEK-293T细胞以包装慢病毒;另一方面,也可单独用于直接转染细胞,用于表达siRNA、miRNA等小RNA。
pLenti-H1含有H1启动子,适合驱动小RNA的表达。同时pLenti-H1含有CMV启动子驱动表达的绿色荧光蛋白基因GFP。直接转染哺乳动物细胞后或者包装好的病毒感染哺乳动物细胞后,CMV启动子能高效启动绿色荧光蛋白GFP的表达,可以方便地通过观察绿色荧光来确定转染或感染效率,从而来推测目的小RNA的表达情况。
慢病毒(Lentivirus)是以 HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的病毒载体系统。它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列或小RNA)导入动物或人的原代细胞或细胞系。慢病毒的宿主范围广,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。pLenti-H1作为慢病毒载体删除了病毒绝大部分的致病基因,保留了包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列长末端重复序列(LTR),并对HIV的5'LTR进行改造,换成CMV启动子,同时对3'LTR进行了缺失突变,使病毒载体失去了自我复制能力,安全性大大提升。pLenti-H1中还加入了WRE元件,能够显著提高外源基因的表达。
pLenti-H1使用特别便捷,本载体通常仅须酶切1小时,无须酶切过夜,即可切胶回用于质粒构建。本载体由于BamH I和Xho I酶切位点之间预插入了一段长1008 bp的片段,从而可以通过电泳来区分单酶切和双酶切的片段,所以pLenti-H1用BamH I和Xho I通常双酶切1小时即可电泳切胶回收目的片段用于后续的连接反应,无需酶切过夜,这样可以显著缩短构建质粒所需的时间。目的小RNA的DNA序列合成并退火后可以直接连接入在BamH I和Xho I酶切位点之间。构建好的能表达目的小RNA的pLenti-H1质粒与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G(VSVG)(D8215)和pCAG-dR8.9(也称为delta8.9或Δ8.9)(D8216)共同转染到HEK-293T细胞中完成慢病毒的包装,就可以制备获得高滴度、自我复制缺陷并且能表达小RNA的重组慢病毒。
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