Super Kfx DNA Polymerase

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Super Kfx DNA Polymerase

所属类别 : 实验室耗材

产品品牌 : 阿拉丁

价格区间 : 0-2000
- 价格：￥537.90-1947.90
  
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- S665679-100U S665679-500U
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商品参数

所属类别:实验室耗材
产品品牌:阿拉丁
价格区间:0-2000

商品描述

品牌货号

别名

阿拉丁S665679

超级 Kfx DNA 聚合酶

规格或纯度

EnzymoPure™

英文名称

Super Kfx DNA Polymerase

储存温度

-20°C储存,避免反复冻融

运输条件

超低温冰袋运输

产品介绍

产品内容

S665679	Component	100 U	500 U	Storage
S665679A	Super Kfx DNA Polymerase, 2 U/μL	50 μL	250 μL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
S665679B	2×Super Kfx Buffer	2×1.25 mL	7×1.8 mL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
S665679C	dNTP Mix, 10 mM each	150 μL	750 μL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品简介

Super Kfx DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，该聚合酶具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性。该酶经其他高保真酶改造而来，添加了独特的延伸因子、特异性促进因子，极大提高了扩增能力，克服了普通Pfu酶扩增能力差、产量低和扩增速度慢的缺陷，缩短了反应时间。本品可用于普通片段、长片段及其他各种复杂模板的扩增，扩增得到的PCR产物的3′端不带有“A”碱基，如需进行T/A 克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品适用于基因克隆、二代建库扩增、基因定点突变、SNP等扩增实验。

活性定义

在74℃，30分钟内，将10 nmoL脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制

经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于98%；经检测无外源核酸酶活性；室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法

以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1. PCR 反应体系

所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分混匀，用完之后请及时放回-20℃保存。

试剂	50 μL反应体系	终浓度
2×Super Kfx Buffer	25 μL	1×
dNTP Mix，10 mM each	1.5-2.5 μL	300-500 μM each
Forward Primer，10 μM	2 μL	0.4 μM
Reverse Primer，10 μM	2 μL	0.4 μM
Template DNA适量	适量	<500 ng/50 μL
Super Kfx DNA Polymerase	0.5-0.75 μL	1-1.5 U/50 μL
ddH2O	up to 50 μL

2. PCR 反应条件

步骤	温度	时间
预变性	98°C	30 s-3 min
变性退	98°C	10-30 s	25-35循环
火延伸	根据引物Tm定	15-30 s	25-35循环
	72°C	4-6 kb/min	25-35循环
终延伸	72°C	5 min

注意：

1）优先使用三步法扩增，三步法无法扩增目的产物或引物Tm值大于68°C，请尝试两步法。

2）变性：简单模板的预变性98℃，30s-1min，对于复杂的模板，预变性时间可延长至3min。

3）退火：一般实验中退火温度比引物的Tm值低3-5℃，如无法得到理想的扩增效率时，应梯度改变退火温度，进行优化；发生非特异性反应时，适当提高退火温度。

4）延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品扩增效率为4-6kb/min，对于长片段及复杂性高的模板建议2-4kb/min。

5）循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数，如果循环次数太少，扩增量不足，循环次数太多，错配机率会增加，所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

Products content

S665679	Component	100 U	500 U	Storage
S665679A	Super Kfx DNA Polymerase, 2 U/μL	50 μL	250 μL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
S665679B	2×Super Kfx Buffer	2×1.25 mL	7×1.8 mL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
S665679C	dNTP Mix, 10 mM each	150 μL	750 μL	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.