产品内容 | M665822 | Component | 5×1 mL | Storage | | M665822A | 2×Multiplex PCR MasterMix (UNG） | 5×1 mL | -20°C. Avoid freeze/thaw cycle.
| | M665822B | ddH₂O | 5×1 mL | -20°C. Avoid freeze/thaw cycle. |
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产品简介
2×Multiplex PCR MasterMix (UNG）是由GoldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs（含dUTP）、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸索即可轻松进行多重 PCR反应。 本产品所含的GoldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有助于实现“困难”模板（比如，高GC含量的模板）的高效扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成 Multiplex PCR MasterMix (UNG）可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。 质量控制 经检验无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；2-8℃存放3天，扩增性能无明显改变。 使用方法 以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。 1. PCR反应体系： 试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 | 2×Multiplex PCR MasterMix (UNG) | 25 μl | 1× | Primer Mix，10 µM each | 1 μl | 0.2 μM | Template DNA | 适量 |
| ddH2O | up to 50 μl |
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注意：引物设计时，尽量减小各引物的Tm间的差值，差值尽量控制在5℃以内。各引物浓度请以 终浓度0.05-0.2μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特 异性扩增时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。 2．PCR反应条件：
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时， 适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。 2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar Taq DNA Polymerase 的扩增效率为1 kb/min。 3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环 次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数 3．结果检测：本产品不含染料，反应结束后，取5 µl反应产物加入适量上样缓冲液后 进行电泳检测结果。 | 
