品牌货号 稳定性与储存 | 阿拉丁G746243 -20℃保存。 |
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英文名称 | GC-rich PCR Buffer |
储存温度 | -20°C储存 |
运输条件 | 超低温冰袋运输 |
产品介绍 | GC-rich PCR Buffer (4管套装)提供了4种不同的GC-rich PCR Buffer,为扩增高GC含量的DNA片段提供了多种不同的选择,大大提高了高GC含量DNA片段的扩增成功率。各种GC-rich PCR Buffer可以单独使用,也可以组合使用。这样可以在更多条件下优化PCR条件。提供了推荐的几种经过优化的GC-rich PCR Buffer的组合方式,便于用户直接选用。根据相关文献报道,单一的GC-rich PCR Buffer对于某一个高GC含量的DNA片段的扩增效果很好,但对于另外一个高GC含量的DNA片段则很可能会扩增效果不太理想。正因为很难采用一种通用的GC-rich PCR Buffer 完成对于不同的高GC含量DNA片段的扩增,因此对于高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点。针对这一实际情况,阿拉丁推出了可以给予用户多种条件进行优化组合的4管套装GC-rich PCR Buffer。本GC-rich PCR Buffer (4种套装)可以适用于各种常见的耐热DNA 聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNApolymerase等。 注意事项: 在使用本试剂盒提供的GC-richPCRBuffer的同时,必须同时使用和DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的含镁离子PCR Buffer。由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明: 1.PCR反应参数的设置也可以参考特定的耐热DNA聚合酶的说明进行。通常对于扩增高GC含量DNA片段的情况,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。2.PCR反应体系的设置可以参考特定的耐热DNA聚合酶进行,仅仅添加适量本试剂盒所提供的GC-rich PCR buffer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:试剂最终浓度体积体积双蒸水或Milli-Q水-(26.75-x)μl(10.7-y)μl10X PCR Buffer (with Mg2+)1X5μl2μl5X GC-rich Buffer1X10μl4μldNTP (2.5mM each)0.2mM each4μl1.6μl模板DNA10pg-1μg*xμlyμl引物混合物(10μM each)0.8μM4μl1.6μlTaq DNA Polymerase (5U/μl)1.25U/50μl0.25μl0.1μl总体积-50μl20μl3.也可以尝试采用0.5X GC-rich Buffer:试剂最终浓度体积体积双蒸水或Milli-Q水-(31.75-x)μl(12.7-y)μl10X PCR Buffer (with Mg2+)1X5μl2μl5X GC-rich Buffer0.5X5μl2μldNTP (2.5mM each)0.2mM each4μl1.6μl模板DNA10pg-1μg*xμlyμl引物混合物(10μM each)0.8μM4μl1.6μlTaq DNA Polymerase (5U/μl)1.25U/50μl0.25μl0.1μl总体积-50μl20μl4.还可以尝试在PCR反应体系中同时含有2-4种不同的1X GC-rich Buffer或0.5X GC-rich Buffer。以形成不同的组合用于优化PCR反应条件。优先推荐的GC-rich Buffer 及其组合(最终浓度)包括:a. 1X GC-rich Buffer Ab. 1X GC-rich Buffer Bc. 0.5X GC-rich Buffer Bd. 1X GC-rich Buffer C e. 2X GC-rich Buffer Cf. 1X GC-rich Buffer C + 1X GC-rich Buffer Dg. 2X GC-rich Buffer C + 1X GC-rich Buffer Dh. 1X GC-rich Buffer C + 0.2X GC-rich Buffer B i. 2X GC-rich Buffer C + 0.2X GC-rich Buffer B 5.可以根据初步的PCR扩增效果,再对效果较好的GC-rich Buffer再进行优化组合,进一步优化GC-rich Buffer的组合。最后根据PCR反应的扩增效果,选择**的GC-rich PCR buffer或其组合。 |
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