Taq-Plus PCR Forest Mix (2x) 的浓度为 2×，使用方便快捷，能减少 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量 Taq-Plus PCR Forest Mix (2x)， 加入模板和引物，并加入 ddH2O 补足体积，使反应体系浓度为 1× 即 可进行 PCR 反应。 该 Mix 最长可扩增 5 kb DNA 片段，具有良好的扩增特异性和模 板兼容性，PCR 产物 3' 端带 A 碱基，纯化后可直接用于 T/A 克隆。 PCR Mix 中包含两种染料，PCR 产物无需添加 Loading Buffer 可直 接点样电泳，且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率，但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的 实验，建议在分析前对 PCR 产物进行纯化，或使用无染料的 Taq-Plus PCR Master Mix (2x) 。

使用方法

1. 常规 PCR 反应体系

a. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进 行调整； b. 不同模板**反应浓度有所不同，以 50 μl 体系为例：模板为基因组 DNA 时， 一般推荐的使用量为 10~400 ng；当模板为质粒或病毒 DNA 时，一般推荐的 使用量为 10 pg~20 ng。

2. 常规 PCR 反应程序

a. 该预变性条件适合绝大多数扩增反应，对于一些复杂模板，例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的 PCR 扩增，预变性时间可适当延长至 10 min，以提高预变性效果；

b. 关于延伸速率，当目的片段长度不超过 2 kb 时，推荐使用 30 sec/kb；当目的片段长度大于 2 kb 时，推荐使用 60 sec/kb。

注 : 如果使用酵母菌液作为 PCR 扩增模板，建议目的片段长度不超过 2.5 kb，若超出 2.5 kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。

3. 凝胶浓度对应的染料迁移距离

注：染料会影响吸光度。

质量控制 核酸内切酶残留检测 将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测 质粒无变化。 核酸外切酶残留检测 将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测 双链 DNA 底物无变化。 稳定性测试 室温存放一周，无明显活性改变。 功能检测 以质粒 DNA 和人基因组 DNA 为模板，扩增 5k 和 3k 两个片段，30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见目的条带。

质量控制

核酸内切酶残留检测：

将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。

稳定性测试：室温存放一周，无明显活性改变。

功能检测：以质粒 DNA 和人基因组 DNA 为模板，扩增 5k 和 3k 两个片段， 30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见目的条带。