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产品简介

  FastPrime DNA Polymerase 是抗Taq酶单克隆抗体和具有高效扩增及保真性能的Taq DNA Polymerase的混合制品，适用于HOT Start PCR。使用FastPrime DNA Polymerase 进行PCR扩增时，高温变性前由于Taq酶抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够 在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq酶 抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。 使用本品无需特殊的对Taq酶抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。 

FastPrime DNA Polymerase具有5′→3′ DNA聚合酶活性、5′→3′ 外切酶和3′→5′ 外切酶活性。与Taq DNA Polymerase相比，FastPrime DNA Polymerase具有扩增效 率高、错配率低的优良性能，能高效率扩增DNA 片段。使用本品扩增得到的PCR产物 3′ 端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克 隆。本产品适用于常规PCR反应和对高保真 性有要求的基因克隆等反应。

 活性定义

  用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74°C，30分钟内，将10 nmol脱氧 核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。 

质量控制

  经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。 

使用方法

  以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。 

1. PCR反应体系 

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物 的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2. PCR反应条件 

注意： 

1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降 低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。 

2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增效率为2 kb/min。 

3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太 多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

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