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  • 快速DNA提取扩增试剂盒
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  • 快速DNA提取扩增试剂盒

    实验室耗材
    阿拉丁
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商品参数
  • 所属类别:实验室耗材
  • 产品品牌:阿拉丁
  • 价格区间:0-2000
商品描述


品牌货号


英文名称

阿拉丁D669986


DNALyse Amplification Kit

储存温度室温,-20°C储存,避免反复冻融
运输条件超低温冰袋运输
产品介绍

产品内容

D669986Component50 TStorage
D669986ABuffer SA15 mLRT
D669986B2×PCR MasterMix1 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
D669986CProteinase K12.5 mgRT
D669986DProteinase K Storage Buffer1.25 mLRT

产品简介

本试剂盒采用独特的缓冲体系，包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试 剂，适用于从各种动植物组织、细菌中一步提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提  取过程无需液氮研磨，无需有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，提取的DNA质量稳定。  本试剂盒提供的2×PCR MasterMix是一种兼容性强的PCR试剂，能够高效特异扩增DNA样品，该试剂包括DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂等。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的筛选。

实验前的准备及重要注意事项

1.  向Proteinase K中加入指定用量的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。




1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2. 使用前请检查Buffer SA是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀出现，请将Buffer SA于56℃水浴重新溶解。

3. 本产品提供的PCR MasterMix为2×，使用时需加入模板和引物，并加入RNase-Free Water补足体积，使其浓度为1×即可进行反应。

操作步骤

1. 取材：

植物材料：取约10 mg样本于离心管（自备）中； 

动物材料：取约10 mg样本于离心管（自备）中；

细菌：取生长状态良好的菌液200-800 μL于离心管（自备）中，收集菌体。

2. 加入200 μL Buffer SA，涡旋混匀。

注意：如果是植物叶片和动物组织，应尽量用研磨杵研磨：如果是植物种子，应事先破碎并研细；   细菌、1-3mm鼠尾样本可直接涡旋裂解。

3.加入10 μL Proteinase K，混匀，56℃孵育10分钟，95℃处理5分钟。

注意：1）如果为动物组织样本，可适当延长56℃孵育时间至30分钟；如有未完全消化的任何组织，   应在下一步离心后尽量彻底去除。

2）95℃处理时注意不要超过5分钟。

4．13,000 rpm（~17,900×g），离心5分钟。

5. 转移上清至新的离心管（自备）中，直接用于PCR扩增，或4℃或-20℃保存溶液。

6. PCR扩增：

1）PCR反应体系：

以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

试剂20μL体系终浓度
2×PCR MasterMix10μL1×
Forward Primer, 10 µM1μL0.4 μM
Reverse Primer, 10 µM1μL0.4 μM
Template DNA1-2μL/
RNase-free Waterup to 20μL/

注意：引物浓度请以终浓度0.2-0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2）PCR反应条件：

注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60秒，无法得到 理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。 

2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/30s 。

3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

3）结果检测：反应结束后取5 µL反应产物，直接进行琼脂糖凝胶电泳检测。


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