产品简介

该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的唾液DNA提取方法，适用于从唾液中 提取基因组DNA。在高盐存在时， DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后， 高纯度的DNA被洗脱于Buffer  EB或去离子水中。纯化得到的DNA纯度好（A260/280 的比值在1.7-1.9之间），完整度高（>15 kb），可用于二代测序、定量PCR、芯片 检测等下游实验。

自备仪器、试剂

1）恒温混匀仪

2）2/15 ml磁力架

3）32通道核酸提取仪

4）96通道核酸提取仪

5）96 DW Plate

6）8 channel Comb

7）Spin tips pack

8）无水乙醇

实验前准备及重要注意事项

1.向25mg Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，之后 -20℃保存。配置好的Proteinase  K溶液勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2.**次使用前按照试剂瓶标签向Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好 标记。

3.Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。

操作步骤

Ⅰ.手动单管操作

1.依次向2.0 mL离心管中加入20 μl蛋白酶K、350 μl唾液和500 μl Buffer KCL。

2.涡旋震荡混匀后，将离心管放于65℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解20分 钟,形成裂解液。

注意：如无恒温混匀仪，将离心管涡旋震荡10秒钟后放于65℃水浴锅中孵育20分钟，期间每隔5分

钟涡旋震荡10秒钟。

3.将离心管从恒温混合仪上取下，短暂离心后加入20 μl Magbeads PN。之后将离心 管放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟或将离心管连续颠倒混匀 15分钟。

4.将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后充分弃 去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

5.将离心管从磁力架上取下，加入750 μl Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无 水乙醇） 后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上震荡混匀2分钟（震荡过程中确Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于 磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离 心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

6.重复步骤5。

7.将离心管从磁力架上取下，加入750 μl Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无 水乙醇）后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上震荡混匀2分钟（震荡过程中确Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于 磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离 心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

8.保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入750ul  Buffer  MW3，待悬起的磁珠 重新吸附于磁力架上后立即充分弃去溶液。

9.保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液， 之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。

10.将离心管从磁力架上取下，加入50-200 μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于 洗脱液中后将其放于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心 管放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。

11.将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液 器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

Ⅱ.与32通道核酸提取仪匹配

1 ．按下表向96DW深孔板中加入相应试剂

4.将加入试剂的深孔板和磁套放于32通道核酸提取仪的相应位置，运行唾液提取程序，约 28分钟后程序运行结束，取出深孔板和磁套。

5.将深孔板6&12列中的洗脱产物转移至1.5 ml离心管中低温保存。

Ⅲ.与96通道核酸提取仪匹配