产品内容 M669899 | Component | 96 T | Storage | M669899A | Buffer GTL | 30 mL | RT | M669899B | Buffer GL | 30 mL | RT | M669899C | Buffer GW1 (concentrate) | 80 mL | RT | M669899D | Buffer GW2 (concentrate) | 50 mL | RT | M669899E | Buffer EB | 30 mL | RT | M669899F | Proteinase K | 2×1.25 mL | RT | M669899G | RNase A (100 mg/mL) | 0.3 mL | RT | M669899H | Magbeads PN | 1 mL | RT |
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产品简介 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从新鲜组织中提取DNA的方法。组织裂 解后， DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后，高纯度的DNA洗脱于EB或去离子水 中。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、 Real-time PCR、 SNP基因分型、 STR基因 分型、二代测序和药物基因组学研究等。 自备仪器、试剂 1. 全自动核酸提取仪 2. 无水乙醇、异丙醇 3. 96 DW Plate、 8 channel Comb 实验前准备及重要注意事项 1. **次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙 醇。 2. 使用前请检查Buffer GTL和 Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉 淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。 3. 如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2 μL DNase-Free 的RNase A（100 mg/mL ），试剂盒中的RNase A如果长时间不用，建议-20 ℃保 存。 4. 实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。 5. Magbeads PN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损 害。 Magbeads PN每次使用时请充分振荡混合均匀。 操作步骤（手动） 1. 称取20-30 mg组织，将组织在液氮中磨碎或使用组织匀浆机打碎，将打碎的组织 转移到1.5 mL 离心管中。 2. 向上述管中加入180 μL Buffer GTL和20 μL Proteinase K之后将离心管固定于 56℃、 1200 rpm恒温混匀仪上震荡裂解1小时或56℃水浴过夜至固体组织充分裂解， 即为Lysate。 3. 可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向Lysate中加入2μL 浓度为100 mg/mL 的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。 4. 向Lysate中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡混匀。 5. 向离心管中加入200 μL 异丙醇与10 μL Magbeads PN后涡旋震荡混匀5秒钟，之 后将离心管固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合10分钟。 6. 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。 7. 向离心管中加入750 μL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋 震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。 8. 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。 9. 重复步骤7-8。 10. 向离心管中加入750 μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡 旋震荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。 11. 将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。 12. 重复步骤10-11。 13. 离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，之后开盖 室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发。 14. 向离心管中加入50-200 μL Buffer EB后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之 后将离心管固定于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟。 15. 将离心管固定于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保 存备用。 操作步骤（与全自动核酸提取仪匹配） 1. 称取20-30mg组织，将组织在液氮中磨碎或使用组织匀浆机打碎，将打碎的组织 转移到1.5 mL 离心管中。 2. 向上述管中加入180 μL Buffer GTL和20 μL Proteinase K之后将离心管固定于 56℃、1200 rpm恒温混匀仪上震荡裂解1小时或56℃水浴过夜至固体组织充分裂 解，即为Lysate。 3. 可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向Lysate中加入2μL 浓度为100 mg/mL 的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。 4. 向Lysate中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡20 s，此刻离心管中液体即为Mixture。 5. 按下表向96 DW深孔板中加入试剂： | 位置 | 试剂及用量 | | 1&7 Colume | Mixture : all | | 1&7 Colume | Magbeads PN: 10 μL | | 1&7 Colume | 异丙醇: 200 μL | | 2&8 Colume | Buffer GW1: 750 μL | | 3&9 Colume | Buffer GW1: 750 μL | | 4&10 Colume | Buffer GW2: 750 μL | | 5&11 Colume | Buffer GW2: 750 μL | | 6&12 Colume | Buffer EB: 100 μL |
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注意： 在1&7列中，可先将异丙醇与Magbeads PN按比例混匀后再加入。 6. 将磁套与96 DW深孔板放入CWE2100中，运行“FFPE/Tissue DNA程序”。 7. 约32分钟后程序运行结束，将96DW深孔板和磁套从仪器中取出，把“6&12 Colume”中的洗脱产物转移至离心管中-20℃保存备用。 | 
