产品简介

该试剂盒适用于从血浆、血清、羊水等无细胞体液中纯化回收游离DNA（Free circulating/Cell-free DNA）。高盐时，游离DNA结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后， 游离DNA洗脱于Buffer  EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时 间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量 PCR、产前诊断等下游实验。

该试剂盒可与磁棒法磁珠自动纯化系统、液体工作站配套使用，简单、快速地进 行高通量提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

自备试剂

1 ．KingFisher Flex

2 ．恒温混匀仪

3 ．无水乙醇

实验前准备及重要注意事项

1 ．向蛋白酶K粉末中加入指定用量的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，之后-20℃ 保存。配置好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2 ．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取得率低。

3 ．**次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。

4 ．Magbeads ZN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads ZN造成不可逆的损害。 5 ．Magbeads ZN在使用前需涡旋振荡20秒使其充分混匀。

操作步骤

手动操作步骤

1 ．向1.5 ml离心管中加入20 μl Proteinase K、300 μl血浆、360 μl Buffer MPL和20 μl Magbeads ZN。

2 ．将离心管放于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟，或涡旋震荡混匀后 56℃水浴10分钟，期间涡旋混匀3次。

3 ．将离心管从恒温混匀仪上取下，之后放于25℃、 1600  rpm的恒温混匀仪上震荡裂解 10分钟或连续颠倒混匀10分钟。

4 ．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。

5 ．向离心管中加入600 μl Buffer CW1，之后将离心管放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀 仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。

6 ．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。

7 ．重复步骤5-6。

8 ．将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器进 一步去除管底溶液。

9 ．向离心管中加入600 μl Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇） ，之后将 离心管放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。

10 ．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。

11 ．重复步骤9-10。

12 ．将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器 进一步去除管底溶液。

13 ．保持离心管固定于磁力架上静置5-10分钟，使乙醇充分挥发。

14 ．向离心管中加入50 μl Buffer EB，涡旋震荡混匀后将离心管放于56℃、 1600 rpm的 恒温混匀仪上震荡10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间涡旋混匀3次。

15 ．将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中低温保存。

与KingFisher Flex匹配

1 ．按下表将样品与试剂加入相应位置：

2 ．打开KingFisher Flex仪器，运行CW2522_Flex程序，按照仪器提示将深孔板与磁套 放入仪器中。

3 ．约50分钟后程序运行结束，取出深孔板。将洗脱板用封口膜封闭后冷冻保存。