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产品简介

Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细 胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂 裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提 试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉 污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。 

注意事项

1．如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。

2．所有样品操作请置于冰上进行。

3．可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Nc-Buffer A:Nc-Buffer B:Nc-Buffer C=100:5.5:50。

4．可以采用更高的速度来离心。

操作步骤

I 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取

1．请在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷

2．收集细胞，计数。离心去上清。

3．1×107 细胞中加入1 ml Nc-Buffer A（按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。

注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Nc-Buffer A的用量，如果蛋白浓度小， 按比例减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。

4．加入55 μl Nc-Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。

5．4℃ 12,000 rpm（~13,400×g）离心 15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的 离心管中，-20℃保存（此提取液为胞浆蛋白）。

6．向上步所得的沉淀中加入500 μl Nc-Buffer C（使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一 次，每次约15-30秒。 

7．4℃ 12,000 rpm离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃ 保存（此提取液为胞核蛋白）。

II 组织中胞浆、胞核蛋白的提取

1．取材，保存组织。

2．在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷。

3．称组织重量，每100 mg组织中加入1 ml Nc-Buffer A（按照1:99比例在蛋白抽提前2-3 分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail），用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵 育20分钟。

注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Nc-Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例 减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。

4．加入55 μl Nc-Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。

5．4℃ 12,000 rpm离心 15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中， -20℃保存（此提取液为胞浆蛋白）

6．向上步所得的沉淀中加入500 μl Nc-Buffer C（使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分 钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。

7．4℃ 12,000 rpm离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中， -20℃保存（此提取液为胞核蛋白）。