LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells，即LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa细胞，简称LSL-mCherry HeLa Cells或LSL-mCherryHela细胞，是阿拉丁通过把含有loxP-STOP-loxP-mCherry元件和G418抗性的质粒转染HeLa细胞，经G418筛选最终获得的单克隆细胞株。本细胞株可以用于检测Cre重组酶的活性，也可以用于检测能表达Cre重组酶的质粒或病毒的效果。LoxP (locus of X (cross)-over inP1)位点是一段34bp的DNA序列，其两端为两个13bp的反向重复序列(invertedrepeats)，中间是8bp的间隔区(图1)。Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase)，也是一种酪氨酸重组酶(tyrosinerecombinase)，它可识别34bp的loxP位点并催化loxP位点之间的DNA发生重组；重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同，两个含单个loxP位点的DNA将发生融合：两个正向重复的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转(图2) 1,2]。图1.loxP位点序列图。Cre重组酶与两端13bp反向重复序列(小写字母)结合，中间是8bp不对称中心间隔区(大写字母)，箭头所示为Cre重组酶的酶切位点。图2. Cre-loxP位点特异性重组示意图。本细胞株中含有loxP-STOP-loxP-mCherry元件，在没有Cre重组酶存在的情况下，mCherry的表达会被阻断，观察不到红色荧光。在细胞中转染表达Cre重组酶的质粒(例如D2608 pCMV-Cre-EGFP)、与可以直接穿透细胞膜的D0512 TAT-Cre Recombinase孵育、或直接转染Cre重组酶(例如D0509 Cre Recombinase)时，Cre重组酶可以剪切并重组loxP位点，去除两个loxP位点之间的3×SV40poly(A)这个STOP元件，从而激活mCherry的表达，随后可以通过荧光显微镜等荧光检测设备进行观察和检测。本细胞株中的loxP-STOP-loxP-mCherry元件通过PCR扩增和测序验证。本细胞株经过支原体检测(Mycoplasma Test)，检测结果为阴性。本单克隆细胞株构建之前通过STR (short tandem repeats)鉴定。Cre重组酶(Cre Recombinase)作用于本细胞株后，细胞的明场和荧光图片请参考图3。图3. 阿拉丁LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells 功能鉴定图。按照每孔约10万LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLaCells接种到24孔板进行培养过夜，使细胞密度能达到约60%。每孔用 PBS洗一次，每孔加入0.5ml含4μM TAT-CreRecombinase的完全培养液(含有血清和链霉素\青霉素)。继续培养6h后，更换为不含TAT-Cre Recombinase的完全培养液，24h后通过荧光显微镜下可以观察到细胞内红色荧光。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。本细胞株的培养条件可以参考HeLa细胞的培养条件，可以同时在培养液中添加终浓度为200μg/ml的G418，以维持适当的筛选压力。进行Cre重组酶测试时，可以考虑去除G418，以减少G418可能产生的干扰。HeLa细胞的基本信息如下：HeLa细胞的详细信息如下:* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility ofthe customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.对于细胞培养瓶或离心管运输的活细胞，室温3-5天有效。对于干冰运输的冻存细胞，液氮保存，长期有效；