本公司生产的蛋白 AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase)，英文名为 Protein AG-MNase，简称 pAG-MNase，是 Protein A/G 与微球菌核酸酶 MNase (Micrococcal Nuclease)的融合表达产物，同时具有 Protein A/G 的抗体结合活性和 MNase 的核酸内切酶活性，常用于蛋白质-DNA 相互作用研 究的 ChIC (Chromatin Immunocleavage)和 CUT&RUN (Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)。Protein A 是一种发现于金黄 色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为 42kDa；Protein G 是 C 型或 G 型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫 球蛋白结合蛋白。Protein A 和 Protein G 功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋 白的 Fc 区，但有资料显示 Protein A 也会和人 VH3 家族的 Fab 区结合，而 Protein G 有时与 Fab 区也有一定结合。本产品是 Protein A 或 G 与 MNase 的融合表达产物的 1:1 混合物，同时具有 Protein A/G 结合抗体和 MNase 核酸内切酶的双重活性。 

来源（Source） ：蛋白 A/ G 与金黄色葡萄球菌（MNase）融合蛋白

组分和说明 

产品应用 

常用于蛋白质 -DNA 相 互 作 用 研 究 的 ChIC (Chromatin Immunocleavage) 和 CUT&RUN (Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)。 

产品优势 

蛋白 AG-微球菌核酸酶同时具备 ProteinG 的抗体结合能力和 MNase 的核酸内切酶活性，特异性结合抗体，广泛的应用领域。

使用说明 

染色质片段化 

反应体系： 反应缓冲液（10X）：50 mM Tris-HCl (pH 7.9)，5 mM CaCl₂。（建议添加 100 µg/ml 重组白蛋白（BSA）以提高稳定性。）

 操作步骤：  

按每 4×10⁶个细胞加入 0.5-1 µl MNase（2000 gel units/µl），在 37℃孵育 15-30 分钟。通过琼脂糖凝胶电泳检测片段化效果，目标片段长度为 150-900 bp。加入适量 0.5 M EDTA（pH 8.0）终止反应。 

染色质免疫沉淀（ChIP） 

染色质片段化：参考上述染色质片段化步骤。 

免疫沉淀：使用蛋白 A-微球菌核酸酶结合抗体，捕获 DNA-蛋白质复合物。 

洗脱与纯化：根据具体实验方案进行洗脱和 DNA 纯化。

CUT&RUN 和 CUT&Tag 

固定细胞：使用甲醛交联细胞。 

抗体结合：加入目标抗体，孵育过夜。 

MNase 消化：加入蛋白 A-微球菌核酸酶，37℃孵育 15-30 分钟，释放 DNA。 

DNA 纯化与测序：提取 DNA 并进行高通量测序。    

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）本品含 50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，否则会冻结，反复冻融可能会影响酶的活性。 

（2）本品较为粘稠，吸取时注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。 

（3）Ca2+是 MNase 的关键催化辅助因子，反应缓冲液含有 1-5mM Ca2+对 MNase 的酶活性是必须的，反应溶液中如有 EDTA、EGTA 等金属离 子螯合剂会影响酶活性。 

（4）反应溶液中盐离子浓度须低于 100mM，过高的盐浓度会影响 MNase 的酶活性。 

（5）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。