本公司生产的 AlkB (RNA/DNA 去甲基化酶, Nuclease-free) 即 AlkB (RNA/DNA demethylase, Nuclease-free)是由本公司自主研发的技术平台 通过大肠杆菌表达、纯化获得的不含 DNase 和 RNase 的高品质重组酶。AlkB 是一种α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate, α-KG)和 Fe(II)依赖的双加氧 酶(Dioxygenase)，可以有效地修复单链或双链 DNA 和 RNA 中的各种烷基化损伤(Alkylation damage)，常被用于去除 RNA 中的 m6A 等甲基化 修饰，去除 DNA 中的 m1A、m3C、m6A 等修饰，并进一步用于后续的 qPCR 或高通量测序分析。N6-Methyladenosine (m6A)是真核生物中一 种最普遍和丰富的 RNA 转录后修饰，存在于各类真核或病毒 RNA，包括 mRNA、rRNA、tRNA、snRNA、microRNA (miRNA)和长链非编码 RNA (Long non-coding RNA, lncRNA)中，这种修饰被认为占据了超过 80%的 RNA 甲基化修饰。mRNA 转录物中 m6A 的丰度会影响 RNA 的多种代谢 过程，例如剪接(Splicing)、出核(Nuclear export)、翻译的能力及稳定性以及 RNA 转录。AlkB 可以在体外以α-酮戊二酸和 Fe(II)依赖的方式催化 RNA 的 m6A 去甲基化，通过生成 6-羟甲基衍生物(HO-m6A)并进一步转化为腺嘌呤(Adenine)。AlkB 是细菌暴露于甲基化试剂环境时产生的一种 适应性应激反应蛋白，不仅可以修复 RNA 的甲基化损伤，还可以修复 DNA 的甲基化损伤。AlkB 催化 DNA 中 1-甲基腺嘌呤(m1A)和 3-甲基胞嘧 啶(m3C)的去甲基化需要 O2、Fe2+和α-酮戊二酸的参与；AlkB 在催化 DNA 去甲基化修饰的同时，将α-酮戊二酸转化为琥珀酸和 CO2，并生成不 稳定的羟甲基，被羟基化的甲基再以甲醛的形式释放。单链 DNA (ssDNA)比双链 DNA (dsDNA)中的腺嘌呤的 N1 和胞嘧啶的 N3 更容易受到甲基 化影响，因此，相比 dsDNA，AlkB 对 ssDNA 中的损伤修复更为高效。 

纯度（Purity） 不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶，不含磷酸酯酶。 

组分和说明 

产品应用

RNA 的 m6A、m1A、m3C 或 m1G 去甲基化；ARM-seq、PANDORA-seq 等；DNA 的 m1A、m3C 和 m6A 的去甲基化。 

产品优势 

AlkB 不含 RNase，可以更好地用于去甲基化修饰及后续的建库和高通量测序 

使用说明

1.AlkB 对 total RNA 的 N6-methyladenosine (m6A)修饰的去甲基化反应： 

a.AlkB 的去甲基化反应。 

参考下表在冰浴中配制如下反应体系。 

注 1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后低速离心沉淀液体。RNA 和 AlkB 用量的微克数保持相同即可。AlkB 用量很少时，可以取适量先使用 Reaction Buffer (1X)进行稀释。如果希望去甲基化程度更加充 分，AlkB 的用量可以适当加大一些。 

注 2：由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。

 b.反应条件：37℃孵育 100min。

说明：为避免环境中 RNase 污染导致的样品 RNA 降解，可以考虑适当加大 AlkB 的用量并适当缩短孵 育时间。 

c.终止反应：加入与反应体系等体积的含 11mM EDTA 和 200mM 乙酸铵的缓冲液可终止反应，或进行酚氯仿抽提。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 

（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。