产品内容

产品简介

本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理30-50 mg组织或5×10⁶细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

产品特点

• 纯度高：最大限度除去蛋白质等杂质，提取的RNA可直接用于下游各种实验。

• 提取量大：独特的裂解液配方，充分裂解细胞或组织，RNA提取量多至100 μg。

• 快速：步骤少，操作简单，节省时间。

• 兼容性强：适用于多种动植物组织和细胞RNA的提取。

自备试剂：

70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项

1. 预防RNase污染，应注意以下几方面：

1） 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2） 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10

分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

3） 配制溶液应使用无RNase的水。

4） 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2. 样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

3. 使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。

4. **次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。

5. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

6. 若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I 对 RNA进行处理。

使用方法

1. 样品处理

1a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon Reagent中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1 mL TRIzon Reagent，混匀。

注意：样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。

1b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50mg组织加入1 mL TRIzon Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon Reagent 1 mL混匀。

注意：样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。

1c.单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzon Reagent（每10 cm²面积需要1 mL TRIzon Reagent），用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5  min，收集细胞沉淀， 仔细吸除所有上清，加入TRIzon Reagent 1 mL混匀。

注意：

1） 收集细胞数量不要超过1×107。

2） TRIzon Reagent加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzon Reagent加量不足， 可能导致提取的RNA中有DNA污染。

3）收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。

3）收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。

1d.细胞悬液：离心收集细胞。每5×10⁶—1×10⁷动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌细胞  加入1 mL TRIzon Reagent。

注意：

1）加入TRIzon Reagent前不要洗涤细胞，以免RNA降解。

2）一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。

1e.血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积的TRIzon Reagent（推荐0.25 mL全血加入0.75 mL TRIzon Reagent），充分振荡混匀。

1f.可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2.样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。

3.每1 mL TRIzon Reagent加入200 μLTRIzon PaI ™，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。

4.4℃ 12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟，此时样品分为三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase- Free离心管（自备）中。

5.在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇（无RNase水配制），颠倒混匀。

6.将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7.向吸附柱中加入700μL Buffer RW1，12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8.向吸附柱中加入500 μL Buffer RW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9.重复步骤8。

10.12,000 rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。

注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。

11.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50 μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

注意：

1） RNase-Free Wate体积不应小于30 μL，体积过小影响回收率。

2） 如果要提高RNA的产量，可用30-50 μL新的RNase-Free Water重复步骤11。

3） 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。