产品内容：

产品简介： 

游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂特别适用于从血清、血浆中分离纯化包括 microRNA和其他小RNA（<200nt）在内的总RNA。本品灵活处理不同起始量的样品， 在有效裂解样本的同时，可有效保存RNA的完整性，提取的总RNA完整性好，无蛋白 和DNA污染，提取的RNA可用于RT-PCR、Northern Blot和分子克隆等下游实验。

自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水（新开封或提取RNA专用）。

注意事项

1．预防RNase污染，应注意以下几方面： 

1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 

2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。 

3）配制溶液应使用无RNase的水。 

4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 

2．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。 

3．本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、 灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面 罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。 

4．样品用游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃可 放置一个月以上。 

5．保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA 半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。 

6．若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I对RNA 进行处理。

操作步骤 

1．取200 μl新鲜或者冻存的血清或血浆，加入3倍体积的游离RNA（血清血浆尿液）提 取试剂。振荡30秒，充分混匀。 

注意：样本加入游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂后，可能会出现沉淀，经过振荡混匀后，沉淀基 本消失。若仍有少量沉淀，不影响下游实验，可继续操作。 

2．将处理后的样品在室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。 

3．向以上溶液中加入氯仿，每使用1 ml血清/血浆样本专用总RNA提取试剂加入0.2 ml氯 仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。 

注意：如不能涡旋混匀，可手动快速颠倒混匀2分钟。 

4．4℃ 12,000 rpm离心20分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水 相，RNA 主要在水相中，把水相转移到一个新的无RNase的离心管（自备）中。 

5．在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置30分钟。或-20℃沉淀 过夜，效果更佳。 

6．4℃ 12,000 rpm 离心20分钟，弃上清。 

注意：离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。 

7．加入75%乙醇（用无RNase的水配制）洗涤沉淀。每使用1 ml游离RNA（血清血浆尿 液）提取试剂加入1 ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8．4℃ 12,000 rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。 

注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。 

9．室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100 μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA 保存在-70℃，防止降解。 

注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。