阿拉丁自行研发生产的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair for Flag&Myc Co-IP)包含pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA两种质粒，可以用于在哺乳动物细胞中表达N端带有3X Flag标签的人源p53和Myc标签的LTA (large T antigen)融合蛋白。因为p53和LTA蛋白间具有较强的相互作用，本质粒对可作为共转染细胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的阳性对照使用，也可以单独转染细胞作为免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的阳性对照使用。免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术，通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠)，或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠)，然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物，从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来，随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等1-2]。pCMV-3X Flag-p53质粒表达p53。p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53)，全长393氨基酸，理论分子量为43.7kDa，实际分子量约为53kDa，是调控细胞周期的重要转录因子，主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等，野生型的p53是一个重要的抑癌基因3]。pCMV-Myc-LTA质粒表达LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen)，也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1)，全长708氨基酸，分子量为81.6kDa，是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化，可以诱导实验动物肿瘤的形成，为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型4]。本质粒对均含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。本质粒对用于磁珠法免疫共沉淀的效果参考图1A，用于琼脂糖凝胶法免疫共沉淀的效果参考图1B。图1. 阿拉丁的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对用于免疫共沉淀的效果图。图A使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) 和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) ，图B使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) 和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) 。293T细胞(人胚肾细胞)单独或共转染pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA质粒36小时后，使用Western及IP细胞裂解液裂解，并使用相应的标签蛋白免疫沉淀试剂盒进行免疫沉淀。泳道1为小鼠IgG磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品，为免疫共沉淀的阴性对照；泳道2、3和4为磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品，其中图A是经3X Flag Peptide或c-Myc Peptide洗脱后的样品，图B是经SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脱后的样品，从泳道4可观察到共转染的Flag-p53与Myc-LTA可以相互作用。Input即全细胞裂解液(Total cell lysate)。Western印迹成像由Imager 600化学发光成像系统完成。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。推荐使用的测序引物序列如下：CMV-F primer: 5' -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'BGH-R primer: 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA的全序列信息:D3041-1 pCMV-3X Flag-p53-全长序列.txt；D3041-2 pCMV-Myc-LTA-全序列.txt。