Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND-99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，其中仅弱碱可部分提供质子，以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。Lyso-Tracker Red适用于活细胞溶酶体的荧光染色，但不适合用于固定细胞溶酶体的荧光染色。Lyso-Tracker Red分子的化学结构式参考图1。 图1.Lyso-Tracker Red的化学结构式。 Lyso-Tracker Red的分子式为C20H24BF2N5O，分子量为399.25，最大激发波长为577nm，最大发射波长为590nm。Lyso-Tracker Red的激发光谱和发射光谱参考图2。 图2.Lyso-Tracker Red的激发光谱和发射光谱。 Lyso-Tracker Red是嗜酸性荧光探针，用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征，包括高度选择靶向酸性细胞器和在纳摩尔浓度有效标记活细胞。Lyso-Tracker Red必须在极低浓度(通常约50nM)下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留(retention)机制虽然没有被研究清楚，但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关，Lyso-Tracker Red探针的内吞作用动力学研究显示染料进入活细胞的摄入时间仅几秒即可。然而，这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化，长期孵育会诱使溶酶体pH值的增加。因此，建议成像前用探针孵育细胞的时间不能太久。Lyso-Tracker Red探针具体使用浓度和孵育时间需要根据自身实验条件和具体细胞种类来进行摸索以达到满意的染色效果。Lyso-Tracker Red在活细胞中染色效果参考图3。 图3.Lyso-Tracker Red对于NRK-52E(大鼠肾小管上皮细胞)的染色效果。Mito-Tracker Green 染色的NRK-52E细胞其线粒体呈现绿色荧光(图B)，Lyso-Tracker Red 染色的NRK-52E细胞其溶酶体呈现红色荧光(图C)，绿色荧光、红色荧光及细胞核蓝色荧光的叠加(merge)效果见图D。其中细胞核使用Hoechst 33342 染色。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。Lyso-Tracker Red适用于活细胞溶酶体的荧光染色，但不适合用于固定细胞溶酶体的荧光染色。如果经Lyso-Tracker Red染色后的细胞需要进行固定操作，可以尝试3%的戊二醛(glutaraldehyde)。按照1:20000的比例稀释，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。