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  • pUCm-T载体
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  • pUCm-T载体

    实验室试剂
    阿拉丁
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商品参数
  • 所属类别:实验室试剂
  • 产品品牌:阿拉丁
  • 价格区间:0-2000
商品描述


品牌货号


稳定性与储存

阿拉丁P749735


-20℃保存。

英文名称pUCm-T Vector
储存温度-20°C储存
运输条件超低温冰袋运输
产品介绍

pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。pUCm-T载体的图谱如图1：pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：


使用说明：

1. PCR产物纯化：a. PCR产物可以通过PCR纯化试剂盒或凝胶回收试剂盒(例如阿拉丁生产的D0033 PCR纯化试剂盒或D0056 DNA凝胶回收试剂盒)进行PCR产物纯化。对于PCR产物条带不是非常单一的情况，宜采用电泳后DNA凝胶回收的纯化方法，这样可以去除PCR扩增出来的非特异性条带的干扰。2. 连接反应：a. 对于常规的DNA ligase连接反应，请参考下面的连接反应体系，或按DNA ligase的说明书进行操作。每个连接反应使用1微升pUCm-T载体，约0.2pmol PCR产物，在20微升连接体系中16℃连接过夜。Sterilized Water?μlT4 DNA Ligase Buffer (10X)2μlPurified PCR Product??μlpUCm-T Vector1μlT4 DNA Ligase (5-10U/μl)1μl总体积20μlb. 对于快速连接试剂盒，请参考相应说明书进行连接反应。pUCm-T 载体的用量还是为1微升，PCR产物的推荐用量约为0.2pmol。实际做连接反应时对PCR产物的使用量没有必要严格定量，根据PCR产物的亮度大致加入适量的PCR产物进行连接反应即可获得比较理想的连接效果。连接反应中使用的水尽量使用Milli-Q级纯水，或使用双蒸水或三蒸水。3. 转化和筛选阳性克隆：按照常规方法进行转化和蓝白斑筛选。转化可以采用阿拉丁生产的D0302超级感受态细菌制备试剂盒。蓝白斑筛选所需的IPTG和X-Gal可以向阿拉丁购买。对于白斑可以进行酶切鉴定，通常酶切鉴定正确后可以进行测序鉴定。


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