耐碱蛋白A磁珠（ATPA Magnetic Beads） 本产品将重组耐碱蛋白A (Recombinant Alkali-Tolerant Protein A)高密度环氧基偶联到磁性琼脂糖微球表面，具有高载量，高特异性，高回收率，低非特异吸附和强耐碱性的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组ATPA只保留了Protein A中抗体特异结合的部分结构域，与Protein A相比，对样品的纯化效果几乎不变，但对碱的耐受性大大提升，在重复使用时，极大地降低了样品交叉污染的风险。

磁珠的参数和指标见Table 1

Table 1：参数和性能指标

使用须知

本产品须与磁性分离设备配套使用

磁珠使用前要混合震荡均匀

磁珠预处理要充分

孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率

在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥

禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤

建议磁珠仅重复纯化同种蛋白

应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

用后及时再生，避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中，避免磁珠长菌

使用方法

样品预处理

（以纯化1ml小鼠腹水为例）

用Wash Buffer将小鼠腹水稀释3-5倍。（细胞培养上清可使用Wash Buffer调节pH至7.0-8.0。）

磁珠预处理

颠倒混匀磁珠，吸取2mL 10%（v/v）磁珠于准备好的5ml EP管内，磁分离架收集磁珠并丢弃上清液；

加入1.8ml的Wash Buffer，磁分离架收集磁珠并丢弃上清液，重复2次；

如有控内毒的需要，请做下面两个步骤：

加入1.8 ml 0.1M NaOH（Cleaning Buffer）孵育 15 分钟。然后使用磁分离架收集磁珠并丢弃上清液，重复此步骤1次。

加入1.8ml的Wash Buffer，颠倒混匀1min，磁分离架收集磁珠并丢弃上清液，重复2次。

结合

将1ml小鼠腹水（pH7.0-8.0）用Wash Buffer稀释3倍至4ml，加入至装有磁珠的EP管中，颠倒混匀，室温缓慢旋转孵育1h（具体时间可根据结合效果调整）。

洗涤

将装有磁珠跟样本的EP管放置在磁力架上，静置1min，吸弃上清，加入1.8ml Wash Buffer，颠倒混匀1min，静置在磁力架1min，吸弃上清；

重复5次。

洗脱

加入3-5倍磁珠体积的Elution Buffer（600ul），室温缓慢旋转洗脱5min；

静置在磁力架上，吸走上清，得到洗脱1；

再加入3-5倍磁珠体积的Elution Buffer（600ul），室温缓慢旋转洗脱5min；

静置在磁力架上，吸走上清，得到洗脱2；

向洗脱的上清中加入1/10 Elution Buffer体积的Neutralization Buffer（60ul）。

分别测洗脱1和洗脱2的浓度，根据需要的抗体浓度决定是否混合。

磁珠再生

（以再生2ml 10%v/v磁珠为例）

（1）将磁珠置于磁力架上，吸弃上清，向EP管内加入与1.8ml Elution Buffer，室温缓慢旋转5min，静置在磁力架上，吸弃上清；

（2）向EP管内加入与1.8ml的Cleaning Buffer，室温缓慢旋转15min，静置在磁力架上，吸弃上清，重复此步骤1次;

（3）向EP管内加入与1.8ml的Wash Buffer，室温缓慢旋转2min，静置在磁力架上，吸弃上清，重复一次；

（4）向EP管内加入1.8ml 20%乙醇，使磁珠的浓度保持在10% (v/v) ，4℃保存。