产品描述

Taq DNA 连接酶催化在含有相邻的 5'-磷酰基和 3'-羟基末端的双链 DNA 中使用 NAD +作为辅因子形成磷酸二酯键。

Taq DNA 连接酶是一种热稳定性连接酶，能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶DNA 链杂交的 两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该连接反应只有当两条寡核苷 酸链与互补靶DNA 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它 来检测单碱基替换。在45℃-65℃范围内，Taq DNA 连接酶均有活性。该酶在1XHiFi Taq Ligase Buffer 中具有绝佳的保真性连接。
1×Taq DNA Ligase Buffer：20 mM Tris-HCl（pH 7.6），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT， 1 mM NAD 和0.1% Triton X-100，45℃温育。该酶需NAD+ 作辅因子，在10×Taq DNA 连接酶缓冲液 中已添加NAD+；为了延长NAD+ 的半衰期，缓冲液应于-80℃贮存。

产品内容

Taq DNA Ligase ( 40U/μl )

10×Taq DNA Ligase Buffer

来源：携带克隆的 Taq DNA 连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。单位活性使用 2 倍连续稀释法测量。

体系配制（50μl）

反应条件：45℃温育 15 min。加入终止染液（50%甘油，50 mM EDTA 和溴酚兰）终止反应。

质量控制分析

1)活性定义：1 单位指50μl 反应体系中，45℃条件下，15 分钟内能使50% 的1μg 经BstEII 消化的λDNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。

2)蛋白浓度（OD280）测量：通过 OD280 吸光度测定。

3)物理纯度评估：通过浓缩和稀释的酶溶液的 SDS-PAGE，随后通过银染检测来评估物理纯度。 通过比较浓缩样品中污染带的总质量与稀释样品中目标蛋白质带的质量来评估纯度。

污染测试

1)单链核酸外切酶活性：在含有放射性标记的单链 DNA 底物和 10μl 酶溶液的 50μl 反应物中，37℃下孵育 4 小时，测定单链核酸外切酶活性。

2)双链核酸外切酶活性：在含有放射性标记的双链 DNA 底物和 10μl 酶溶液的 50μl 反应物中，37℃下孵育 4 小时，测定双链核酸外切酶活性。

3)双链内切核酸酶活性：在含有 0.5μg 质粒 DNA 和 10μl 酶溶液的 50μl 反应中，37℃温育 4 小时，测定双链内切核酸酶活性。

4)大肠杆菌16S rDNA污染检测：使用5μl 变性酶溶液的重复样品进行评价，并使用对应于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物在 TaqMan qPCR 测定中筛选污染性大肠杆菌基因组 DNA 的存在。

 
应用：