产品说明

Pfu DNA Polymerase 是一种来源于嗜热菌 Pyrococcus furiosus 的高度热稳定的 DNA 聚合酶。Pfu DNA Polymerase 有 5'-3'聚合酶活性和 3'-5'外切酶活性。DNA 合成中，Pfu DNA Polymerase 比普通 DNA Polymerase 有更好的保真性， Pfu DNA Polymerase 最适宜的温度是 72℃和 78℃，它在 95℃加热 1 小时仍有 95%以上的活性。

FAPON Pfu DNA Polymerase 是野生型pfu DNA Polymerase 的突变株，相比于野生型的Pfu DNA Polymerase，具备更强的扩增效率和持续合成能力，对于长片段、高 GC 模板的扩增性能也明显的优于野生型，同时和野生型的 Pfu DNA Polymerase 具备同等的保真性。不同于常规具有校对活性的 DNA Polymerase，改造后的 Pfu DNA Polymerase 在优化的体系中能够用较短的延伸时间、较少的循环数以及宽范围的模板浓度下达到理想的产物量。

产品特点

1)保真性高、适用于广泛的扩增片段；

2)只需要少量 DNA 起始样本即可进行可靠的扩增反应；

3)富含 GC 靶标扩增；

4)长片段扩增，能从复杂模板中扩增 5-10kb 片段。

产品内容

Pfu DNA Polymerase (2.5U/μl)

5×Pfu buffer

25mM dNTP

Solution II

适用范围

基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析、末端补平等。

PCR 扩增操作流程

1)将 Pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)、5×Pfu buffer 和 25mM dNTP 置于冰上融化，短暂混匀。

2)按下表设置 PCR 仪反应程序，开启热盖，温度设置于 98℃。

※注：  PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定**的反应条件（温度、时间等）， 本品 Pfu DNA Polymerase 的延伸速度为每分钟 0.5kb。

1) 按照下表配制PCR 体系，注意此步骤需于冰浴中操作。

注 1：如需提高扩增特异性和扩增产物浓度，可以添加一定浓度的 Solutin II，添加比例参见下表

注 2：配制反应液时，请最后加入 Pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)，因为本酶有很强的 3’→5’外切酶活性，有可能降解引物。

4)混匀后，快速离心，使反应液均收集到管底。

注意事项

1)Pfu DNA Polymerase 是野生型Pfu 的突变株，具有 3’→5’的外切酶校正活性，扩增时延伸速度高于野生型，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 Pfu DNA   Polymerase 的延伸速度为 1-2kb/min；同时 pfu  酶的 3’→5’的外切酶活性可能降解引物，所以应最后把 Pfu DNA Polymerase 到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。

2)Pfu DNA Polymerase 的热稳定性比 Taq   酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

3)PCR 扩增过程中相关参数的优化（50μl 反应体系）