产品内容 | H666048 | Component | 5 mL | Storage | | H666048A | 2×HyperProbe Mixture | 5×1 mL | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | H666048B | ddH2O | 5×1 mL | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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产品简介
HyperProbe Mixture是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等）进行实时荧 光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含新型工程DNA酶、PCR Buffer、dNTPs、 Mg2+以及增强剂和稳定剂，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录 后的cDNA靶序列检测。 本品含有高灵敏度工程DNA酶，能在有效减少常温条件下由引物和模板非特异性 结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增的同时，大幅提升检测灵敏度和扩增效率， 酶的激活仅需在95℃孵育30 s，大大缩短了PCR的反应时间。优化的PCR缓冲体系与 混合酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，能够显著提高PCR的扩增效率，荧光 信号更强，灵敏度更高。 注意事项 1.使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。 2.避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃ 避光保存。如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。 3.ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，本品中不含ROX 染料，如所使用仪器需匹配ROX染料。 注意事项 1．使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。 2．本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光 照射。 3．避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃， 避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。 4．本品不能用于探针法荧光定量PCR。 使用方法 以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和 目的片段大小不同进行相应的改进和优化。 PCR反应体系
试剂 | 50 μl体系 | 25 μl体系 | 20 μl体系 | 终浓度 | 2×HyperProbe Mixture | 25 μl | 12.5 μl | 10 μl | 1× | Forward Primer，10 μM Reverse Primer，10 μM Probe2) | 1 μl 1 μl 1 μl | 0.5 μl 0.5 μl 0.5 μl | 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl | 0.2 μM1) 0.2 μM1) 0.2 μM | Template DNA3) | X μl | X μl | X μl |
| ddH2O | up to 50 μl | up to 25 μl | up to 20 μl |
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注意： 1）通常引物浓度以0.2 M可以得到较好结果，可以在0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率 不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。 2）所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用 时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。 3）通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板 中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定**的模板使用量。 2. PCR反应条件 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 30s1） |
| 变性 | 95℃ | 10 s | 40-45 个循环数 | 退火/延伸 | 58℃ | 20 s2） | 40-45 个循环数 |
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注意： 1）本产品所采用的酶在预变性95℃、30 s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良 好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模 板充分解链，若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响；对于简单模板也可采用预变性20 s， 可根据模板情况确定**的预变性时间。 2）建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以58-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反 应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进 行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。 几种常见仪器的退火延伸时间设定见下表： 使用Roche，BioRad、Agilent和宏时、东胜龙等公司荧光定量PCR仪时请设定在20 s。 使用ABI 7000/7300/7500时请设定在30 s。 退火/延伸时间可根据使用不同型号仪器和不同模板进行设定，请按照仪器使用说明书要求进行实 验操作。
Products Content: | H666048 | Component | 5 mL | Storage | | H666048A | 2×HyperProbe Mixture | 5×1 mL | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | H666048B | ddH2O | 5×1 mL | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
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