阿拉丁P669980

Plant Genomic DNA Kit

产品内容

产品简介

本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA 及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本，可纯化获得最大为50 kb的DNA，多数片段在20-30 kb之间。本试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序，无需乙醇沉淀， 简单快速地分离得到高纯度的DNA，有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。本品可以在1 小时内完成总DNA的提取，纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

自备试剂：β-巯基乙醇、氯仿、无水乙醇。

注意事项

1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2. Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，1 ml Buffer GP1加1 μl β-巯基乙醇。加入 β-巯基乙醇的Buffer GP1 室温可保存1个月 。

3.**次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

4. 使用前请检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀， 请将Buffer GP1和Buffer GP2于65℃水浴重新溶解。

5. 如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GP1孵育后，加入4 μl DNase-Free的RNase A（100 mg/ml），RNase A本试剂盒并未提供。

操作步骤

1. 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg，加入液氮充分研磨。

2. 将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中，加入700 μl 65℃预热的Buffer GP1（使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。

注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl浓度为100 mg/ml 的RNase  A溶液，震荡混匀，室温放置5-10分钟。

3．加入700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm（～13,400×g）离心5分钟。

4. 小心将上层水相转入一新的离心管（自备）中，加入700 μl Buffer GP2，充分混匀。

5. 将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7.

8．12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

9．将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-100 μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃ 保存DNA。

注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH 值低于7.0时洗脱效率不高。

2）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3）用另外的50-100 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

4）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于100 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg， 推 荐 用 50μl Buffer GE 或灭菌水洗脱 。 

5）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer  GE洗脱并于-20℃保存。