产品简介

本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过 的血液样品）、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总 DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1 mL的全血，最 高得率可达30 μg，可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA，纯化的DNA产量高、质 量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧 光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。

自备试剂：无水乙醇。 

实验前准备及重要注意事项：

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 

2．本试剂盒最多可以提取0.1-1 mL全血样品或1×107个白细胞。 

3．**次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水 乙醇。 

4．使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL 于56℃水浴孵育重新溶解。 

5．试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

操作步骤：

1．样品处理： 1a. 提取200 uL血液样品时，向离心管（自备）中加入样本后，可直接进行下一步实验。 1b. 当血液样本量小于200 μL时，加入Buffer GR补足至200 μL，再进行下一步实验。 1c. 当血液样本量超过200 μL时，加入1~2.5倍体积的Buffer RCL，轻轻涡旋或颠倒混匀， 12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟，小心吸弃上清液，如果沉淀中还有红色， 可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200 μL Buffer GR，震荡至彻底混匀,再 进行下一步实验。 1d. 如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血，其红细胞为有核 细胞，血液样本量为5-20 μL，可加入Buffer GR，补足至200 μl后进行后续实验。 注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4 μL RNase A（100mg/mL）溶液，震荡15秒，室温放置5 分钟。RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：CW0601S。 

2．向以上溶液中加入20 μL Proteinase K，混匀。 

3．加入200 μL Buffer GL，震荡至彻底混匀。 注意：不要将Proteinase K和Buffer GL进行预混。 

4．56℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。 注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。 

5．加入200μL无水乙醇，颠倒混匀数次。短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。 

6．将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM）中，若一 次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸 附柱重新放回收集管中。 

7．向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。 

8．向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。 

9．12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底 晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等） 

10．将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有 很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值 低于7.0时洗脱效率不高。 2）如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5分钟， 12,000 rpm离心1 分钟。 3）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并 于-20℃保存。