产品内容：

本试剂盒基本原理为DNA经亚硫酸氢钠处理后，可使未甲基化的胞嘧啶转变为 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。并采用独创高温处理方法，极大的缩短了转变时间， 提高了转变效率，转变效率可达到99%以上。同时采用硅基质膜式纯化柱通过简单的 结合-洗涤-洗脱步骤，可从甲基化修饰后的溶液中回收纯化DNA，回收的DNA纯度高， 完整性好，可直接用于测序、甲基化PCR检测、芯片分析、连接和转化、酶切、标记、 显微注射、PCR和体外转录等各种分子生物学实验。

自备试剂：无水乙醇、75%乙醇。  

实验前准备及重要注意事项 

1．产品配用方法： 

（1）10次包装配制方法：CT Conversion Reagent是固体混合物，一定要在首次使用前 制备好。将2 ml无菌水、100 μl M-Dissolving Buffer和300 μl M-Dilution Buffer加入到CT Conversion Reagent管中。 在55°C溶解并震荡直至全部溶解。 在使用之前将 CT Conversion Reagent 溶液在室温(20°C -30°C)下避光保存。每管的CT Conversion Reagent 是针对10次 DNA 处理设计的，为了得到较好的结果, 配置好的CT Conversion Reagent应当 立即使用，如果不立即使用，可将CT Conversion Reagent 溶液在-20°C存储1周，使用前， 请务必将存储的CT Conversion Reagent 溶液在室温下解冻，并且通过振动或颠倒2分钟以充 分混匀，CT Conversion Reagent对光很敏感，所以要尽量减少在光下的暴露。 

（2）50次包装配制方法：CT Conversion Reagent、M-Dissolving Buffer均固体混合物， 一定要在首次使用前制备好。将5 ml无菌水加入到M-Dissolving Buffer中震荡溶解，待固 体全部溶解后将M-Dissolving Buffer管中溶液全部转移至CT Conversion Reagent管中同 时补加5.5 ml无菌水。再将1.5 ml M-Dilution Buffer加入到CT Conversion Reagent管中。 在55°C溶解并震荡直至全部溶解。在使用之前将 CT Conversion Reagent 溶液在室温 (20°C -30°C)下避光保存。每管的 CT Conversion Reagent 是针对50次 DNA 处理设计的， 为了得到较好的结果, CT Conversion Reagent应当在制备后立即使用，如果不立即使用， 可将 CT Conversion Reagent 溶液在-20°C存储1周，使用前，请务必将存储的 CT Conversion Reagent 溶液在室温下解冻，并且通过振动或颠倒2分钟以充分混匀，CT Conversion Reagent对光很敏感，所以要尽量减少在光下的暴露。 

2．**次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在M-Wash Buffer中加入无水乙醇。

操作步骤

每次制备的DNA 范围在 1 ng-4 μg之间，**量为500 ng-2μg。 

1．取20 μl DNA样品，加入到离心管（自备）中，如果样品量不足，用水补至20μl。 

2．向DNA样品中加入2.2 μl 的 M-Dilution Buffer，混匀样品。 

3．42℃水浴30分钟。 

4．向上步得到的样品中，加入220 μl配制好的 CT Conversion Reagent溶液，混匀， 80℃恒温水浴锅中避光孵育60分钟。 

5．向上步溶液中加入480 μl M- Buffer PA，温和上下颠倒混匀。

6．柱平衡：向已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DS）中加入200 μl Buffer PS， 12,000 rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收 集管中。  

将步骤5所得溶液全部加入到吸附柱（已装入收集管）中，室温放置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：吸附柱最大容量为750 μl，若样品体积大于750 μl可分批加入 。 

8．向吸附柱中加入500 μl M- Buffer PA，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液， 将吸附柱放回收集管中。 

9．向吸附柱中加入650 μl M-Wash Buffer（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 

10．12,000 rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 

11．将吸附柱放入一个新的离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加20 μl M-Elution Buffer（pH 8.5），室温放置2分钟。12,000 rpm离心1分钟收集DNA溶液。 

12．向收集的20 μl DNA中加入2.2 μl M-Dilution Buffer，室温静止30分钟。  

13．向溶液中加入500 μl预冷的无水乙醇后颠倒混匀，并将溶液置于-20℃沉淀30分钟（过 夜沉淀效果更好）。 

14．12,000 rpm离心15分钟，轻轻倒掉上清。 

15．加入75%乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉上清，室温下待乙醇挥发后，加入20 μl M-Elution Buffer溶解，DNA置于-20℃保存。此步收集的DNA可以用于后续相关实验。